新一代CAR-T疗法：四大创新技术破解疗效与安全难题

新一代CAR-T疗法：四大创新技术破解疗效与安全难题

近年来，嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法在治疗血液恶性肿瘤方面取得了重大突破。然而，尽管总体治疗效果显著，但仍有一定比例的患者无法从CAR-T治疗中获益，且存在复发率高和副作用等问题。新一代CAR-T细胞疗法通过引入各种分子机制，如额外的共刺激域、安全开关、免疫检查点调节等，有望克服现有疗法的局限性，进一步提高疗效并减少副作用。

CAR-T细胞疗法的结构演变

随着CAR-T细胞技术的不断发展，其结构也在不断优化。第一代CAR-T细胞结构包含肿瘤相关抗原的高亲和力单链抗体（scFv）、跨膜结构域和唯一的细胞内TCR-ζ或FcR-γ结构域。然而，第一代CAR-T细胞的临床效果有限，主要表现为增殖能力低和体内细胞毒性不足。

为了解决这一问题，第二代CAR结构增加了额外的细胞内共刺激结构域，最常见的是CD28或4-1BB。这些改进后的CARs在治疗血液瘤方面表现出显著效果，已有多种CAR-T产品获得监管部门批准。

第三代CAR-T结构进一步增加了共刺激结构域的组合，而第四代和第五代CAR-T细胞则包含额外的共刺激结构域，并在抗原识别时诱导表达细胞因子（例如IL-12），或包含某些细胞因子受体的细胞内结构域。

免疫检查点调节的创新

新一代CAR-T细胞通过调节免疫检查点，可以有效规避抑制性的肿瘤微环境。在血液肿瘤治疗中，研究主要集中在破坏程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）途径。例如，NCT03258047临床试验中，研究人员将PD-1融合到细胞内CD28激活域，使得PD-L1与PD-1的结合转化为激活信号，预期会产生更有效的抗肿瘤效果。结果显示，完全缓解率（CR）和客观缓解率（ORR）分别为41.2%和58.8%。

此外，还有研究探索了重编程CAR-T细胞以分泌PD-1-Fc融合蛋白的方法，以及敲除PD-1和TIGIT受体的策略。例如，Anbal-cel在r/r大B细胞淋巴瘤（LBCL）患者中的CR达到78%。

TRUCKs：表达细胞因子的CAR-T细胞

TRUCKs（重定向用于通用细胞因子介导杀伤的T细胞）是新一代CAR-T细胞，被设计为表达某些细胞因子，以增强CAR-T细胞的抗肿瘤效力，提高其持久性，并改变肿瘤微环境的特征。

目前，多项临床试验正在评估TRUCKs治疗血液系统恶性肿瘤的效果。例如，表达IL-7和趋化因子CCL19的CAR-T细胞在r/r DLBCL患者中的CR率为4/7，ORR为5/7。此外，表达IL-18的CAR-T细胞和表达CCR4的抗CD30 CAR-T细胞也在临床试验中显示出积极效果。

安全开关技术

为了解决CAR-T疗法伴随的治疗相关毒性问题，研究人员开发了安全开关技术。通过在CAR-T细胞中结合安全开关，可以在给予外源药物后诱导细胞凋亡或通过补体依赖性细胞毒性（CDC）和抗体依赖性细胞细胞毒性（ADCC）来清除CAR-T细胞。

常见的安全开关方法包括将截短的表皮生长因子受体（EGFRt）结合到CAR-T细胞中，以及使用RQR8自杀基因、诱导型半胱天冬酶9（iCasp9）和单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）Mut 2基因等。这些技术在临床试验中显示出良好的安全性和可控性。

通用CAR-T细胞

传统CAR-T产品主要采用自体T细胞制造，存在制造时间长、T细胞质量不稳定等问题。新一代通用CAR-T细胞通过分子工程技术，从供体来源的细胞中去除主要组织相容性复合物（MHC）和T细胞受体（TCR）分子，可以克服这些局限性。

CRISPR/Cas9技术在T细胞工程中的应用已取得初步安全性和可行性验证。例如，NCT04502446试验中，针对CD70抗原的CAR-T细胞设计为消除TCR、MHC-I和CD70的表达，结果显示ORR为47%，CR为20%。NCT04264078试验中，通过CRISPR/Cas9破坏TCR和CD7基因的通用CAR-T细胞在r/r T-ALL患者中显示出80%的CR率。

展望

新一代CAR-T细胞治疗在临床上逐渐趋于成熟。最成功的新一代CAR-T细胞可能具备以下特征：使用CRISPR/Cas9技术制造的通用同种异体CAR-T细胞，具有免疫检查点抗性，表达将T细胞运输到肿瘤部位的细胞因子，并包含安全开关机制。这种组合有望克服现有CAR-T疗法的局限性，进一步改善患者的治疗结果。