药品GMP指南推荐：微生物挑战法操作全解析
药品GMP指南推荐：微生物挑战法操作全解析
微生物挑战法是药品GMP（Good Manufacturing Practice）指南中推荐的重要检测方法，主要用于评估无菌制剂包装系统的密封性。通过在包装外部引入特定微生物，观察其是否能侵入包装内部，从而判断包装的密封性能。这种方法特别适用于那些无法用物理方法检测的复杂包装系统。
菌株选择
在微生物挑战测试中，菌株的选择至关重要。根据2023年版《药品GMP指南 无菌制剂》以及USP <1207.2> Package Integrity Leak Test Technologies的推荐，铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是首选的挑战菌株。原因如下：
体积小：铜绿假单胞菌的尺寸约为1.5～3.0μm×0.5～0.8μm，这种微小的体积使其能够通过微小的泄漏点，有效模拟真实环境中的微生物侵入情况。
活动性强：该菌具有鞭毛，运动能力较强，能够在液体环境中主动寻找泄漏通道，提高检测的灵敏度。
标准认可：铜绿假单胞菌已被多个权威标准认可，如ATCC9027和CMCC（B）10104，这些菌株在化妆品和注射剂包装密封性测试中广泛应用。
测试方法
微生物挑战法的具体操作步骤如下：
样品准备：将待测试的包装系统（如输液瓶、西林瓶等）灌装培养基，并在正常生产线上完成压塞、轧盖和灭菌处理。
菌悬液制备：制备高浓度的铜绿假单胞菌悬液，浓度需达到或超过1×10⁵ CFU/mL。通常采用TSB培养基培养5小时，然后通过离心和调整浓度来制备。
样品浸泡：将包装样品完全浸入菌悬液中，确保封口外表面充分接触菌液。根据《药品GMP指南（第2版）无菌制剂》，可以使用金属丝架固定试样容器使其倒置在菌悬液中。
压力条件模拟：在智能密封仪中施加特定压力。例如，先将抽滤瓶压力抽至真空度为25kPa并维持3小时，然后恢复至常压；再将容器置于压力为25kPa的正压环境下维持3小时，最后恢复至常压继续放置1小时。
消毒与培养：取出样品后，用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒外表面，擦干残余菌悬液。然后将样品在30°C～35°C的条件下培养7天，观察微生物生长情况。
结果判断：如果包装内部未检测到微生物生长，则认为包装密封性良好；如果检测到微生物，则说明包装存在泄漏点。
注意事项
在进行微生物挑战测试时，需要注意以下关键点：
菌悬液浓度：需确保全程维持在1×10⁵ CFU/mL以上，以模拟生命周期中最差环境条件。
压力条件：应模拟实际运输和使用中可能遇到的最不利条件，如高空运输时的低压环境。
数据可靠性：需符合GMP要求，确保数据和记录在整个生命周期内清晰可读取、可追溯、可保存。
生物安全：由于使用高浓度菌液，需采取适当的安全防护措施，避免对人员和环境造成污染。
最新标准要求
自2024年2月1日起实施的团标TZJPA 002-2023《注射剂包装密封性检查 微生物挑战：浸入式暴露试验要求》对微生物挑战法提出了更详细的技术要求。该标准从试验程序、挑战容器、微生物选择、培养基选择和样品准备、取样、挑战悬液制备以及暴露试验条件等多个参数进行了规定。同时，强调了数据可靠性的重要性，要求试验过程中的数据和记录必须符合GMP要求，确保可追溯性和完整性。
微生物挑战法作为评估无菌制剂包装系统密封性的重要手段，其科学性和有效性已得到广泛认可。通过严格遵循GMP指南和相关标准，可以确保药品在生产、运输和储存过程中的无菌状态，从而保障患者用药安全。随着技术的不断发展，微生物挑战法将在药品质量控制中发挥越来越重要的作用。