组织切片染色操作全过程讲解及其在病理诊断分析中的作用

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@小白创作中心

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https://www.bio-equip.com/showarticle453138021.html

组织切片染色技术是病理诊断与分析中不可或缺的一项基本功。通过将组织、器官、细胞等样品切成薄片并进行染色处理，研究人员可以在显微镜下观察和研究组织的结构和组成，检查是否有异常细胞或病理变化，以观察诊断某些疾病的发生发展过程。本文将详细介绍组织染色切片的诞生全过程及其在病理诊断分析中的具体应用。

实验目的不同，选择的组织和器官也是不同的，不同的组织器官在形态、结构及细胞组成等方面均存在差异。选择合适的研究对象，是病理分析过程中获得有效科研数据的关键。

例如：下图为胚胎期14.5天与16.5天的小鼠胚胎（左），以及对应胚胎期的心脏（右）。

组织及时固定可以防止细菌的腐蚀和组织的自溶，尽量保持细胞的形态与结构，还可以使组织硬化，便于后续制作切片。目前常见的固定切片方式有石蜡切片和冰冻切片。对比详见下表：

固定方式	优点	缺点
石蜡切片	组织保存时间长，切片薄，适合长期保存	制作时间长，需要经过脱水、透明、浸蜡等步骤
冰冻切片	制作速度快，适合紧急情况	组织保存时间短，容易出现冰晶损伤

染色是指用组织化学试剂或染料对组织切片进行处理，使组织中的不同成分被染上相应的颜色或产生不同的折射率，以利于后续的观察和分析，帮助观察者更好地识别和分辨细胞和组织结构。化学染色、免疫组化、免疫荧光是三种常用的染色手段。

包含H&E染色、masson染色等多类，主要是指在组织切片上显示组织和细胞中某些特殊化学成分的技术，利用无色的试剂与组织和细胞中某一成分发生化学反应，在原位生成有色沉淀的产物。

a. H＆E染色：即苏木精-伊红染色法( hematoxylin-eosin staining ) ，苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
b. Masson三色染色：是结缔组织染色中最经典的一种方法。染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关，染料成分苯胺蓝的分子量很大，进入结构疏松的、渗透性高的胶原纤维，使胶原纤维呈蓝色，其他易于小分子渗透的组织被品红渗透呈红色。
c. 普鲁氏蓝染色法：主要用于检测组织中的铁和铁蛋白，在酸性条件下，切片内的高铁盐与亚铁氰化钾作用生成亚铁氰化铁，经普鲁士蓝染色后，铁呈蓝色，细胞核呈红色。
d. LFB染色：使用的是劳克坚牢蓝（Luxol Fast Blue,LFB属于铜-酞箐染料），一般用于脑、脊髓、外周神经髓鞘等组织器官的染色，主要用来显示神经髓鞘的形态结构及病理变化。LFB染色后，神经髓鞘呈蓝色，背景淡蓝色或近乎无色。
e. PAS染色：又称碘酸雪夫染色，主要用来检测组织中的糖类。过碘酸是一种强氧化剂，能把糖类相邻两个碳上羟基氧化成醛基，再用schiff试剂和醛基反应呈现紫红色。

f. 油红O染色：使用油红O。这是一种脂溶性的偶氮染料，是很强的脂溶剂和染脂剂，与甘油三酯结合呈小脂滴状，使组织内的脂肪呈现出橙红色，常用于染色组织和细胞内的脂质和脂肪沉淀。一般用于冰冻切片的组织。
g. 甲苯胺蓝染色：即利用甲苯胺蓝（Toluidine Blue），一种醌亚胺类碱性染料，将细胞核染为蓝色。肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺，遇到甲苯胺蓝染色切片可呈紫蓝色。