荧光的原理与检测方法

荧光的原理与检测方法

荧光是一种常见的光学现象，在生物医学、化学等领域有着广泛的应用。本文将为您介绍荧光的基本原理及其检测方法，帮助您更好地理解这一神奇的现象。

什么是荧光？

荧光是一些原子和分子吸收特定波长的光（激发：Ex），随后短暂发射 (Em) 更长波长的光的特性（图 2）。激发和发射峰之间的距离称为斯托克斯 (Stokes) 位移，该位移取决于荧光基团（图 1）。

荧光利用一个外部光源，在特定波长下激发样品。荧光基团受到适当波长的激发，分子从基态转化成激发态。随着分子回到基态，能量会以热（损失能量）和能量更低、波长更长的光的形式释放（图 3）。

图 1

图 2

图 3

如何进行荧光检测？

具备荧光强度 (FI) 检测模式的微孔板读板机使用一种光源（通常是氙闪灯或 LED），来激发特定波长的荧光基团（荧光分子）。可以使用一个特定波长的滤光片或可连续调节波长的单色器，来选择激发样品所需的波长。

荧光基团随后会释放出一个不同波长的发射光，经由另一个滤光片或单色器进入检测器 PMT。光电倍增管 (PMT) 可以检测这种发射的荧光，样品的荧光强度用相对荧光强度单位（RFU）表示。