实验指南 | 肺炎链球菌的形态特征、培养特性、鉴别与药敏分析

实验指南 | 肺炎链球菌的形态特征、培养特性、鉴别与药敏分析

肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）是引发社区获得性肺炎、侵袭性感染等多种疾病的病原体。本文将深入剖析肺炎链球菌的形态特征、培养特性、生化反应，以及与其他相近菌种的鉴别要点，并就药敏试验的药物选择与结果解读提供详细指导。

形态与染色

肺炎链球菌是革兰阳性球菌，呈矛头状，成双或链状排列，宽端相对、尖端相背，有荚膜。很少呈链状，所形成的链为短链状（细菌数<6个），在血培养阳性标本中成双排列。在痰标本中大多数成双排列，少数呈鱼群状排列。

图1、A：肺炎链球菌纯培养的镜下形态(革兰染色)，B：血培养阳性标本直接涂片镜下形态(革兰染色)，C：肺炎链球菌肺炎痰标本直接涂片，矛头状，成双或短链状，有荚膜，也可无荚膜(革兰染色)，D：肺炎链球菌肺炎痰标本直接涂片，鱼群状排列(革兰染色，箭头所示)

培养特性

在血琼脂平板上35℃5%10%CO2环境中培养1824h形成细小、圆形、中央呈脐窝状、表面光滑、湿润、灰色、扁平、直径0.5~1.5mm的菌落，周围有宽大的草绿色溶血环。继续培养，菌落会自溶，只残留菌落痕迹。部分肺炎链球菌可形成水滴状、湿润、透明的黏液型菌落。

图2、从左至右分别为肺炎链球菌在血琼脂平板上的菌落特征（1824h），痰标本肺炎链球菌在血琼脂平板上的菌落特征（1824h；箭头所示），部分菌株湿润、透明的黏液型菌落（18~24h)

生化反应

触酶试验阴性，荚膜肿胀试验阳性，胆盐溶解试验阳性，主要生化反应见下表。

图3、肺炎链球菌胆盐溶菌阳性（澄清、透明）（左侧试管澄清、透明，示胆盐溶菌阳性；右侧试管浑浊，为草绿色链球菌胆盐溶菌阴性对照）

图4、肺炎链球菌胆盐溶菌阳性（平板法、箭头所示）

表1、肺炎链球菌主要生化反应

注：“+”，90%以上菌株阳性；“-”，90%以上株阴性；“S”，敏感

鉴别要点

1. 本菌特征革兰阳性双球菌，矛头状成对排列，宽端相对、尖端相背，菌落细小，中央凹陷，周围有宽大的草绿色溶血环，分解菊糖，胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感。
2. 与草绿色链球菌的鉴别，两者镜下形态相似，且均为α溶血，鉴别见下表。

图5、肺炎链球菌与草绿色链球菌镜下形态（革兰染色）左图为草绿色链球菌；右图为肺炎链球菌

表2、α溶血性链球菌鉴别的关键性试验

注：“+”，90%以上菌株阳性；“-”，90%以上株阴性；“*”，偶尔一些草绿色链球菌胆汁七叶苷弱阳性

药敏试验的药物种类选择

表3、药敏试验的药物种类选择

注：①脑脊液中的肺炎链球菌应常规报告青霉素、头孢噻肟、头孢曲松或美罗培南的MIC。左氧尔沙星敏感：可预报其对吉米沙星和莫西沙星也敏感，反之不可。青霉素：无纸片扩散法折点，可用西林纸片法结果（当直径>20mm）预测青素的敏感性，或直接检测青霉素的 MIC，不能报告苯唑西林的敏感性。②目前第二、三代头孢菌素无纸片扩散法折点，需要进行MIC法检测。③药敏试验必选药物并不代表临床治疗首选药物，临床治疗首选应参考相关抗微生物治疗指南。具体参照CLSIM100-S26版及最新版本。

结果解释与要点提示

1. 肺炎链球菌为口腔和鼻咽部正常菌群，一般不致病。当机体抵抗力下降时，如在寒冷刺激、感冒和麻疹后，可引起大叶性肺炎或支气管肺炎，还可弓起化脓性脑膜炎、中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑脓肿、血症和心内膜炎等。近年来耐青霉素的肺炎链球菌（PRSP）及多重耐药（MDR）菌株的增加，给临床治疗带来一定的困难。
2. 脑脊液分离的肺炎链球菌应常规报告青霉素、头孢肟、头孢曲松或美罗培南MIC，这类菌株的万古霉素敏感性检测可以用MIC法或纸片扩散法。
3. 苯唑西林抑菌圈直径≥20mm的肺炎链球菌分离株对青霉素敏感（MIC<0.06ug/ml）。当苯唑西林抑菌圈直径<19mm时，应检测青霉素和头孢噻肟、头孢曲松或美罗培南的MIC值，因为抑菌圈直径<19mm时，可能是青霉素耐药、中介或某些敏感株。苯唑西林抑菌圈直径<19mm的菌株，在没有做青霉素MIC试验之前，不能报告为青霉素耐药。

总结

肺炎链球菌，一种革兰阳性、矛头状、成对或短链排列的球菌，以其特有的菌落特征、生化反应及对特定药物的敏感性，区别于其他链球菌。其在人体免疫功能下降时引发肺炎、脑膜炎等多种严重疾病，且近年来耐药菌株的增多，加大了治疗难度。本文详尽阐述了肺炎链球菌的形态学、培养特性和生化特性，强调了其与草绿色链球菌的鉴别要点，列举了药敏试验的药物选择，并对结果解释进行了明确指导。特别指出，脑脊液中肺炎链球菌的药敏测试应常规包括青霉素、头孢噻肟、头孢曲松或美罗培南的MIC测定，且临床治疗决策应参考抗微生物治疗指南，而非单纯依据药敏试验必选药物。通过理解并掌握这些关键信息，临床医生能更准确地识别肺炎链球菌感染，合理选择抗生素，应对日益严重的耐药问题，从而提升患者治疗效果与预后。