化妆品防腐效能试验方法详解：CTFA法与USP法对比

化妆品防腐效能试验方法详解：CTFA法与USP法对比

防腐效能试验是确保化妆品安全使用的重要环节，通过在产品中加入特定微生物，检测其存活和增减情况，来评估防腐剂的使用效果。本文将详细介绍两种常用的防腐效能试验方法：CTFA法和USP法，包括试验要求、菌株选择、培养条件等关键步骤。

防腐效能试验又称微生物挑战性试验，主要用于测定防腐剂有效抗菌的最低浓度，以决定化妆品配方中防腐剂的用量。无论是新配方开发还是现有产品的质量控制，以及新防腐剂的使用，均需要进行防腐效能试验。试验方法是在化妆品样品中加入微生物，通过观察微生物的存活和增减情况来判定防腐剂的量是否合适。如果测试中加入的微生物数量保持不变或增加，说明产品的防腐系统是无效的。在防腐系统良好的样品中，微生物的数量应在规定时间内减少到可接受的水平。

CTFA 法

CTFA试验使用的微生物包括：

• G+球菌：如金黄色葡萄球菌
• G-杆菌：如大肠杆菌、铜绿假单胞菌
• 霉菌：如黑曲霉和黄青霉
• 酵母菌：如白色念珠菌
• 需氧产芽孢菌：如蜡芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌
• 耐防腐剂作用的由产物分离出来的菌株

CTFA使用的细菌培养基包括：

• NA（营养琼脂培养基）
• TSA（水解大豆琼脂培养基）
• EA（琼脂培养基）

适宜于真菌生长的培养基包括：

• SDA（糊精琼脂培养基）
• PDA（马铃薯琼脂培养基）
• MA（琼脂培养基）

菌体保存条件：

• 细菌或酵母菌：5℃斜面保存
• 霉菌：室温斜面保存

接种物制备：

• 细菌和酵母菌：用肉汤或琼脂培养基培养
• 收获的菌体用于微生物检验

微生物检验：

• 取样量：20g或20mL
• 接种浓度：1x106CFU/mL（或g）产物
• 眼部用品：酵母菌和霉菌浓度1x104CFU/mL（或g）产物
• 接种体积不应超过总体积的1%

培养条件：

• 细菌：32~35℃
• 真菌：25~30℃

观察时间点：

• 0、1、2、3天（仅用于眼部化妆品）
• 7、14、28天

中和剂稀释培养基：

• LBL
• LBLT
• TGB
• WB

USP 法

USP使用的微生物包括：

• 金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）
• 大肠杆菌（ATCC 8739）
• 铜绿假单胞菌（ATCC 9027）
• 白色念珠菌（ATCC 10231）
• 黑曲（ATCC 16404）

培养基：

• SCDA（大豆酪蛋白消化性琼脂培养基）

菌种活化：

• 细菌：35℃培养18~24h
• 酵母菌：20~25℃培养48h
• 丝状真菌：20~25℃培养一周

菌悬液制备：

• 细菌和酵母菌：用无菌生理盐水收集，浓度1x107CFU/mL
• 丝状真菌：用含0.05%吐温-80的无菌水收集，浓度1x107CFU/mL

接种：

• 接种比例：0.01mL接种液：20ml试验样品
• 微生物浓度：1x105~1x106CFU/mL
• 培养温度：20~25℃

检测方法：

• 平板计数法
• 检测时间点：第7、14、28天
• APC（菌落形成单位）计算

有效性判断：

• 14天后细菌生存数应减至初始浓度的0.1%
• 酵母和霉菌生存水平可能更低
• 后期阶段必须维持在既定水平以下