植物组织培养中微生物污染的应对之策-培养基灭菌彻底

植物组织培养中微生物污染的应对之策-培养基灭菌彻底

植物组织培养过程中，真菌和细菌污染是极为常见且棘手的问题。这一过程中，培养基、接种器具、超净工作台、接种室等工作环境，只要消毒稍有不慎，或者无菌操作不够规范，都可能导致微生物污染的发生。此外，某些植物生长于温暖多雨的环境，其茎叶表面及组织内部会滋生大量表生及内生微生物，部分侵入表皮内薄壁组织的菌丝体和内生微生物，难以通过常规表面消毒处理彻底清除，它们会随着组织材料进入培养过程，引发污染，导致组培失败。

污染发生途径

污染的发生途径多种多样。若污染菌类在培养基中零星分散，大概率是人为因素所致，比如培养基灭菌不彻底；超净工作台长时间未换滤网，净化能力下降；接种用具灭菌不完全；操作不当，动作生硬迟缓，开瓶时间过长，接种台物品摆放杂乱，操作中心位于人体活动范围内；接种室环境长期未灭菌，微生物数量过多等。若污染菌类从材料周围滋生，则可能是花卉材料本身带菌，例如接种用具灭菌不达标，接种时材料被污染；或者未能及时察觉污染苗，致使接种过程中出现交叉感染。若菌类从材料培养基以上部分长出，且发生在 5 天之后，表明是材料携带的内生菌所致；若从培养基以下开始长菌，时间较早且有从里向外扩散的趋势，则是切口污染，原因可能是灭菌后未剪去两个切口，或者虽剪去但器具带菌。

无菌环境的重要性

无菌操作及无菌环境对组培苗的正常生长发育起着决定性作用。植物组织培养是在人工控制的条件下，将植物体的一部分进行离体培养，使其发育成完整植物体的过程。其核心在于为培养材料提供适宜的营养条件和环境条件，而无菌环境是保障这一过程顺利进行的基石。在无菌条件下，培养材料能够专注于自身的生长、分化和发育，避免微生物的干扰和侵害。一旦染菌，微生物会与培养材料争夺营养物质，分泌毒素，改变培养基的理化性质，抑制培养材料的生长，甚至导致其死亡，严重阻碍组培苗的正常发育进程，影响植物组织培养的成功率和效率。

培养基灭菌方法

为了确保培养基能符合无菌要求，我们需要对培养基及各种使用器具进行彻底消毒灭菌。除了常规的湿热灭菌法、干热灭菌法。化学消毒试剂也是常用的消毒手段之一。例如，过氧化氢银离子复合型消毒剂（如诺福组培杀菌抑菌剂），具有高效广谱的杀菌能力，能够快速杀灭细菌、真菌、病毒等多种微生物，且不会产生有害残留。在使用时，可按照一定比例稀释后，对操作台面、工具、器皿等进行喷洒、擦拭或浸泡消毒。对于培养基的消毒，可将适量的过氧化氢银离子消毒剂加入培养基中，然后进行湿热灭菌，它能够在灭菌过程中持续发挥杀菌作用，进一步降低微生物污染的风险，并且其稳定性好，无需过滤灭菌，能直接加入培养基高温灭菌而不影响使用效果，使用更加方便，在合理的使用剂量下，不会对植物的生长（如种子萌发，愈伤增殖、再生等）产生有害影响。