高效液相色谱仪（HPLC-ELSD）对咖啡因的检测定量

高效液相色谱仪（HPLC-ELSD）对咖啡因的检测定量

高效液相色谱仪（HPLC-ELSD）是一种常用的化学分析仪器，广泛应用于药物、食品、环境等领域的物质检测。本文将详细介绍使用HPLC-ELSD对咖啡因进行检测定量的方法。

检测原理

通过将待检样品溶解于水中，并通过高效液相色谱系统分离后，进入蒸发器中。在蒸发器中，样品溶剂以气态形式被去除，留下固态样品，然后通过光散射检测器检测样品的散射光。根据样品在蒸发后的散射光强度与浓度之间的关系，可以定量或定性分析样品中的目标化合物。

检测方法

1. 仪器与试剂

• 高效液相色谱仪（1260 InfinityⅡ）
• 蒸发光散射检测器（1260 InfinityⅡ ELSD）
• 安捷伦科技有限公司
• 电子天平，梅特勒托利多科技（中国）有限公司
• 混匀仪（JOANLAB VM 500PRO），艾科迈科学仪器浙江有限公司

2. 标准溶液

• 咖啡因（1000mg/L），北京曼哈格生物科技有限公司
• 乙腈（色谱纯）

3. 曲线的配制

4. 高效液相色谱条件

• 液相色谱柱：ZORBAX SB-C18（150mm×4.6mm×5μm）或者等柱效
• 色谱柱柱温：40℃
• 进样量：20μL
• 色谱柱流速：0.6mL/min
• 液相流动相A：实验室自制超纯水
• 液相流动相B：乙腈（色谱纯）
• 流动相A：流动相B=72%：28%
• 洗脱时间：10min
• 雾化气体：氮气
• 蒸发管温度：70℃
• 漂移管温度：65℃
• 增益：5.0

5. 样品前处理

称取样品0.1-0.5g，使用实验室超纯水或甲醇水溶液进行溶解稀释定容10mL，然后再讲样品溶液放置在振荡器上振荡混匀后，取样品溶液于样品瓶中待测。

测试结果的分析

经过上述色谱条件，对目标物咖啡因的标准溶液进行色谱分析处理，在系列浓度范围内有良好的线性体现，其R2≥0.998以上，具体目标物在色谱图上的体现如下图所示：

结论

以上方法的测试通过验证是可行的，此检测方法测试过程简单，检测时间短，使用的检测试剂单一且常用，对于多种基质的样品可以进行处理检测，因此该实验的检测方法值得使用。