反相Flash柱层析可以干法上样吗？

反相Flash柱层析可以干法上样吗？

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反相柱层析是一种常用的分离纯化技术，广泛应用于化学、生物等领域的样品制备。在进行反相柱层析时，上样方法的选择对实验结果有着重要影响。本文将探讨反相Flash柱层析的上样方法，特别是干法上样和湿法上样的区别。

反相柱层析最常用的填料是C18反相硅胶填料，这类反相硅胶是利用C18烷基硅烷将硅胶的-SiOH基团封住，形成了很多C18键合微孔，对于小极性的化合物吸附能强，相反对大极性的化合物的吸附能力弱，因此和正相硅胶的洗脱顺序相反，因此称为反相硅胶。

我们在进行反相柱层析时，梯度洗脱开始以大比例极性水溶液开始，由于C18反相硅胶填料表面疏水性，疏水官能团就会发生蜷缩，因此使用前需要用极性有机溶剂活化（疏水官能团得以舒展），再过渡到水溶剂（保持其吸附活性）。活化平衡的步骤必不可少，否则会明显影响分离效率。

对于乙腈(甲醇）/水体系的C18填料的反相柱，湿法上样是应用最广泛，使用最简单的上样技术。如果是固体样品，只需将样品直接溶解在尽量少的溶剂中，然后注入色谱柱中即可完成上样，而如果是液体样品，其上样方式则会更简单，直接将样品注入色谱柱即可。但是湿法上样有一些缺点：1、当上样体积增大时，样品在色谱柱当中所占用的体积会增大，扩散效应也会明显增强，导致色带变宽，降低分离效率，纯度也随之降低；2、请尽量使用大极性的溶剂溶解样品，如果极性过小，样品还没有来得及和固定相相互作用，就已经被极性溶剂洗脱下色谱柱，导致保留时间不够，洗脱不充分，分离效率大大降低。特别是极性特别大的样品，湿法上样后很容易直接把样品冲出，没有分离效果。