局部毒性试验

局部毒性试验

局部毒性试验是评估物质对生物体局部组织（如皮肤、黏膜、血液等）潜在毒性的关键步骤，广泛应用于药品、医疗器械、化妆品和化工产品的安全性评价。以下是溶血、过敏和刺激性试验的核心内容、方法及标准：

一、溶血试验（Hemolysis Test）

目的：评估材料或化合物是否会导致红细胞破裂（溶血），适用于与血液直接接触的产品（如注射剂、植入材料、透析器械等）。

1. 试验方法：

• 体外试管法（ASTM F756）：

2. 样本制备：测试材料浸提液（如生理盐水或细胞培养基）与抗凝全血（人/动物）按比例混合。
3. 孵育：37℃孵育1~3小时，离心分离上清液。
4. 检测：分光光度法（540nm）测定游离血红蛋白浓度。
5. 计算： 溶血率(%)=样品吸光度−阴性对照吸光度阳性对照吸光度−阴性对照吸光度×100%溶血率(%)=阳性对照吸光度−阴性对照吸光度样品吸光度−阴性对照吸光度 ×100%

• 体内法：通过动物模型（如家兔）静脉注射受试物，观察血浆游离血红蛋白变化。

2. 判定标准：

• 无溶血：溶血率＜5%；
• 轻微溶血：5%~10%；
• 显著溶血：＞10%（视为不合格）。

3. 适用标准：

• 国际：ISO 10993-4（医疗器械血液相容性）；
• 国内：GB/T 16886.4-2022。

二、过敏试验（皮肤致敏试验，Skin Sensitization Test）

目的：评估物质引起迟发型超敏反应（Ⅳ型过敏反应）的潜力，常用于化妆品、外用药物和材料。

1. 试验方法：

• 豚鼠最大化试验（GPMT，OECD 406）：

2. 致敏阶段：皮内注射弗氏完全佐剂（FCA）与受试物，一周后局部涂抹激发剂量。
3. 激发阶段：间隔2周后涂抹亚刺激剂量，观察皮肤红斑、水肿等反应。
4. 评分：根据皮肤反应强度分为0（无反应）~3（严重反应）级。

• 局部淋巴结试验（LLNA，OECD 429）：

2. 致敏：小鼠耳部涂抹受试物连续3天。
3. 检测：注入³H-胸腺嘧啶，测量耳部淋巴结细胞增殖指数（SI）。
   SI=受试组细胞增殖量阴性对照组细胞增殖量SI=阴性对照组细胞增殖量受试组细胞增殖量
4. 判定：SI≥3为阳性致敏物。

• 体外替代方法：
• 人细胞系活化试验（h-CLAT）：检测CD86和CD54在THP-1细胞的表达。

2. 结果分级：

• 弱致敏性：SI 3~8；
• 强致敏性：SI＞8（如甲醛、镍盐）。

3. 适用标准：

• 国际：OECD 429/442；
• 国内：GB/T 21827-2008（化学品皮肤致敏试验方法）。

三、刺激性试验（Irritation Test）

目的：评估物质对皮肤、眼睛或黏膜的局部刺激或腐蚀作用。

1. 皮肤刺激性试验：

• 体内法（Draize Test，OECD 404）：

2. 操作：家兔背部去毛皮肤涂抹受试物，封闭接触4小时。
3. 观察：24/48/72小时记录红斑、水肿，按0~4级评分。
4. 结果：

• 无刺激性：平均分＜2；

• 中等刺激：2~5；

• 强刺激性：＞5。

• 体外替代法：

• 重组人皮肤模型（EpiSkin/EpiDerm，OECD 439）：检测细胞活力（MTT法），预测刺激强度。

2. 眼刺激性试验：

• 体内法（Draize Test，OECD 405）：

2. 操作：家兔眼内滴入受试物，观察72小时角膜浑浊、虹膜炎症等。
3. 评分：最高分110分，若≥3分需进一步评估。

• 替代方法：
• 鸡胚绒毛尿囊膜试验（HET-CAM，ISO 10993-10）：评估血管损伤（出血/凝血）。
• 牛角膜浑浊渗透性试验（BCOP，OECD 437）：测量浑浊度与渗透性变化。

3. 适用标准：

• 国际：ISO 10993-10（医疗器械生物学评价）；
• 国内：GB/T 16886.10-2017。

四、试验选择与监管要求

产品类型 重点试验 核心标准
医疗器械 溶血试验、皮内反应试验 ISO 10993系列、GB/T 16886
化妆品 皮肤致敏、眼刺激试验 OECD 406/439、中国《化妆品安全技术规范》
药品（外用） 皮肤刺激、过敏试验 ICH S5/S8、USP <1032>
工业化学品 全套局部毒性试验 REACH法规、GB 30000系列

五、发展趋势与替代技术

2. 3R原则（替代、减少、优化）：

• 器官芯片：模拟人体组织微环境，用于动态毒性评估。
• 计算毒理学：QSAR模型预测致敏性（如Toxtree软件）。

4. 多组学整合：结合转录组和代谢组分析，揭示毒性机制。
5. 国际验证替代方法：

• OECD认可：h-CLAT（致敏）、EpiSkin（刺激）等；
• 中国进展：逐步采纳体外方法替代动物试验。

六、试验设计注意事项

2. 样本代表性：材料浸提比例（如1g/10mL）、浸提介质（极性/非极性）。
3. 对照设置：阴性对照（生理盐水）、阳性对照（SDS/月桂基硫酸钠）。
4. 动物福利：遵循AAALAC认证要求，减少动物使用量。
5. 数据解读：结合临床暴露剂量与试验结果，评估实际风险。

通过系统化的局部毒性试验，可全面评估产品的生物安全性，确保其临床应用或消费使用的合规性。选择试验方案时需综合考虑产品特性、监管要求及技术创新，以实现科学、伦理与效率的平衡。

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370
有效期至：2030年4月15日

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日