实验动物病理取材步骤以及注意事项,附不同脏器取材细节
实验动物病理取材步骤以及注意事项,附不同脏器取材细节
在生物医学研究中,实验动物病理取材是获取准确实验数据的关键步骤。本文详细介绍了病理实验动物取材的完整流程和注意事项,包括取材前的准备工作、基本要求、不同脏器的取材细节以及取材后的病理分析要点。
取材前准备
进行病理实验动物取材前,需要充分准备相关工具和试剂。具体包括:
取材用具:动物固定板、外科手术刀、镊子、解剖剪刀、滤纸纱布、固定容器、固定液以及实验记录本等。如果需要对脏器进行称量或拍照,还需准备天平、尺子和标签。
所需试剂:麻醉剂、固定液和生理盐水。
废物存放:应使用有明显标志的黄色垃圾袋来存放动物尸体和废弃脏器,锐器盒则用于存放废弃的针头、刀片和注射器等。
取材基本要求
在进行取材时,需要遵循以下基本要求:
动物麻醉及处死过程应迅速进行,这既符合动物伦理要求,也能避免动物组织死后自溶,从而影响实验结果的准确性。
在取材时,应对动物模型的外表和脏器进行肉眼观察,并做相应的实验记录。
取材人员应对所取样本有充分了解,取材过程要迅速。对于易自溶的组织,如肠道和腺体,应优先处理。
取材时使用的剪刀和刀片应保持锋利,镊子尽量避免使用齿镊,夹取脏器时应用无齿镊夹住其周围的结缔组织。
如无特殊要求,所选组织应尽量包含脏器的全部层次或重要结构。若相同器官需要多次取材,选材部位应尽量保持一致。
剖检应在设有解剖台的解剖室内进行,小动物可在大小适宜的搪瓷盘内进行。剖检完成后,应及时对用具和场地进行严格消毒,特别是处理死于传染病的动物尸体时,要严防病原扩散。
动物尸体应及时收入冰柜,并按照医疗垃圾的处理方法进行妥善处理。
注:动物尸检时,常被忽视的体表检查也非常重要。例如,四肢水肿可能提示动物生前患有心脏、肝脏、肾脏或关节炎症等疾病;尾巴坏死可能是外伤(如夹伤、打斗等)或注射时损伤血管导致血液供应不足造成的;天然孔如口腔、鼻孔周围有血液,可能是食道或上呼吸道损伤;肛门周围污秽则可能提示动物生前有腹泻现象,多患有肠道疾病等。
病理实验动物各脏器取材细节
注意事项
在进行病理实验动物取材时,需要注意以下事项:
若发现肉眼可见的病变,应认真观察并准确选取病变部位的组织,切勿漏取,以确保全面反映组织病变的全貌。同时,需要由表及里地观察病变状况,测量重量、记录部位和体重等。
根据实验方法、目的以及病变情况,应尽量多取材,并确保所选取的组织材料包含各脏器的主要结构部分。
应避免选取因解剖失误造成的凝血块和坏死组织等。
在取病理材料时,应避免压挤(以免组织变形)、刮抹(以免组织缺损)和冲洗(以免红细胞和其他细胞吸水肿胀破裂)。
所取的材料应尽量保持肉眼标本的完整性,厚度不宜过厚或过薄。建议选用1.5cm×1.5cm×0.5cm的取材规格。
在组织分离时,应注意钝性分离,避免用器械直接夹伤组织。如果脏器上附有血液、黏液等污物,应用生理盐水冲洗后再进行固定。如果血液过多导致固定液变色,应及时更换固定液。
胃肠标本在取材前应将内容物冲洗干净。
对于肝肾等较大的脏器,可以先将其切成较薄的块状组织进行固定,或者稍固定后再切成片状继续固定。
对于垂体、肾上腺、甲状腺等小组织,应平铺于滤纸上再进行固定。
取材后病理分析注意事项
在进行病理分析时,需要注意以下事项:
常规HE染色时,切片厚度应根据不同组织类型进行调整。
在光镜下观察时,应首先区分有无特异性病变及其范围,然后由脏器的一端向另一端进行整体观察和描述。
观察小动物脏器时,应注意有无肿大、增生等现象。可以使用10倍镜由一端开始计数该脏器包含的10倍镜镜头视野数,或计数整个切片中的功能单位数。
对于大动物的脏器,如果怀疑有肿大、增生等情况,可以使用40倍镜头计数每一视野中的细胞或功能单位数。
在确定病灶大小后,应使用40倍镜头进行观察。可以先将镜头的圆周与观察的病灶边缘相切,再观察该病灶在这一视野中的比例。
在计算实验动物肿瘤发生率时,不论肿瘤是良性还是恶性,均应计入肿瘤发生数,并计算肿瘤发生率。
本文原文来自美凤力生物技术有限公司