伤口愈合实验揭示NGF与proNGF对乳腺癌干细胞迁移的影响

伤口愈合实验揭示NGF与proNGF对乳腺癌干细胞迁移的影响

引用

丁香园

1.

https://3g.dxy.cn/bbs/topic/33879015

伤口愈合实验是体外研究细胞迁移的一个有用实验。其原理是在铺板的单层细胞中制造一个空白的无细胞地带，然后观察这些边缘细胞的迁移活动，直至它们重新接触在一起。

法国科研人员在2015年发表于《STEM CELL》的研究中提出，神经生长因子（NGF）和神经生长因子前体（proNGF）能够激活乳腺癌干细胞并促进其侵袭。研究使用乳腺癌细胞系和肿瘤分离细胞进行伤口愈合实验，发现经NGF处理的肿瘤分离乳腺癌细胞的伤口愈合速率显著提高，证实了NGF能促进乳腺癌细胞迁移。

研究中使用了Ibidi开发的伤口愈合插件，这是一种双孔硅胶插件，孔壁宽度为500μm。将细胞种植在插件中，待细胞贴壁长满后移除插件，形成无细胞的"划痕"区域。

实验材料

1. 细胞：MCF-7、肿瘤分离细胞
2. 实验耗材：伤口愈合插件培养皿 (ibidi, 81176)
3. 细胞培养基：MEM medium
4. 试剂：EGF（sigma，E9644）、bFGF（R&D，233-FB）、NGF（Scil Protein）、proNGF（Alomone Labs，N-285）
5. 灭菌镊子

实验步骤

1. 铺细胞

• 去除ibidi伤口愈合培养皿底部的保护胶带。
• 在ibidi细胞插件的每孔中加入1 × 104的细胞悬液，避免大力晃动。
• 在37°C培养箱中孵育24小时。

2. 形成"划痕"

• 采用无血清MEM培养基培养细胞4小时。
• 使用镊子小心移除插件。
• 用显微镜检查是否形成合格的"划痕"。
• 清洗细胞后加入2ml培养基进行培养。

3. 采集并分析图像

• 在显微镜下选取能同时看到"划痕"和两边细胞的视野进行成像，"划痕"方向应为水平或垂直。
• 采集0h和4h的图像，并分析每张图的细胞覆盖划痕区的面积。

实验结果

实验结果显示，经NGF处理的细胞在4小时时覆盖面积最大，迁移速率最快。这表明NGF对乳腺癌细胞的迁移具有显著促进作用。

参考文献：
Tomellini E, Touil Y, Lagadec C, et al. Nerve Growth Factor and proNGF Simultaneously Promote Symmetric Self-Renewal, Quiescence, and Epithelial to Mesenchymal Transition to Enlarge the Breast Cancer Stem Cell Compartment. STEM CELLS, 2015, 10.1002/stem.1849.

本文原文来自丁香园