免疫层析试纸条的工作原理与结构组成

免疫层析试纸条的工作原理与结构组成

免疫层析试纸条法中应用最广泛的是胶体金免疫层析技术（gold immunochromatographic assay，GICA）。GICA是以NC膜为固相载体，在反应过程中，目的蛋白与其特异性抗体结合形成抗原-抗体复合物，并通过胶体金对目的蛋白特异性抗体进行示踪显色。通过试纸条的C线和T线是否显色判断目的蛋白是否表达。该方法结果直观且简便、快速，但检测灵敏度较低。

试纸条由样品垫、结合垫、反应膜、检测线（T线）、质控线（C线）、吸收垫及背衬组成。

试剂条各部分作用如下：

1.样品垫：检测样本滴加位置，对检测样本具有一定的过滤和缓冲作用，降低样本中离子强度或者酸碱度对检测结果的干扰。

2.金垫：将胶体金标记抗体通过干燥固定在玻璃纤维素膜上，是追踪抗体与抗原的反应。

3.硝酸纤维素膜：膜上预先包被上检测线和质控线，能够与胶体金标记物发生免疫反应相结合，使胶体金在检测线发生聚集，根据检测线的显色状况进行判读结果。

4.吸水垫：通过吸水作用使液体样品向上流动，带动金垫上的金标抗体向上移动，从而与检测线的抗原发生反应。

图 免疫层析试纸条结构（改编自夏启玉等，2017）

免疫层析试纸条可分为两类，夹心法和竞争法。以胶体金夹心法为例，简单介绍一下原理：将金标抗体（Au）Ab1吸附在结合垫上，捕获抗体Ab2喷涂于T线，抗Ab1二抗喷涂于C线。待测样品通过毛细管作用向前层析，层析至结合垫上时溶解其上的金标抗体，如果样品中含有待检抗原（Ag）则会与（Au）Ab1结合，形成（Au）Ab1-Ag继续向前层析，前行到T线时被抗体Ab2捕获形成（Au） Ab1-Ag-Ab2的复合物，T线显现红色条带，过量的（Au）Ab1继续前行，在C线处被抗Ab1二抗捕获形成复合物，C线也显示红色条带，为阳性结果；若T线无条带，C线为红色条带，为阴性结果。