小鼠非酒精性脂肪肝模型构建方法详解
小鼠非酒精性脂肪肝模型构建方法详解
小鼠非酒精性脂肪肝（NAFLD）模型的构建是研究其发病机制、药物筛选及治疗策略的关键实验基础。根据致病因素和病理特征，现有模型可分为以下几类，结合研究目标和实验需求可选择合适方法：
常用建模方法
一、饮食诱导模型
1. 高脂饲料（HFD）模型
· 方法：使用含45%-60%脂肪的高脂饲料（如D12492）喂养C57BL/6J或昆明小鼠，周期为12-24周。部分研究添加胆固醇（0.2%-2%）或胆酸盐以增强脂质沉积。
· 特点：
- 病理特征：脂肪变性显著，伴随胰岛素抵抗、炎症和纤维化（长期喂养后）。
- 适用性：模拟人类代谢综合征相关NAFLD，但纤维化进展较慢。
- 优化方案：联合果糖饮水（如4.2%果葡糖浆）可加速炎症发展，16周后出现坏死性炎症和纤维化。
2. 胆碱-蛋氨酸缺乏（MCD）模型
· 方法：饲料中不含蛋氨酸和胆碱，含40%蔗糖和10%脂肪，喂养4-8周。
· 特点：
- 快速成模：2周出现脂肪变性，4周后发展为肝炎和纤维化。
- 局限性：动物体重下降明显，缺乏胰岛素抵抗，与人类病理差异较大。
3. 高脂高果糖高胆固醇（ALIOS）模型
· 方法：高脂饲料（30%反式脂肪酸）联合果葡糖浆喂养，周期16周。
· 特点：
- 代谢紊乱：体重增加、胰岛素抵抗增强，但脂肪变性程度与单纯高脂饮食无显著差异。
二、药物诱导模型
1. 四氯化碳（CCl₄）模型
· 方法：腹腔注射CCl₄（5%植物油溶液，每周1-2次）联合高脂饮食，加速肝纤维化。
· 特点：
- 病理特征：肝细胞坏死、混合性脂肪变性和纤维化，但无肥胖和胰岛素抵抗。
- 适用性：需与饮食模型结合以模拟NASH进展。
2. 链脲佐菌素（STZ）模型
· 方法：出生后2天小鼠注射STZ（200μg/L）并喂养高脂饲料，20周后出现脂肪性肝炎、纤维化甚至肝癌。
· 特点：
- 病理特征：符合NAFLD组织学标准，但因破坏胰岛β细胞，不模拟全身性胰岛素抵抗。
三、基因编辑与复合模型
1. 基因缺陷模型
- ob/ob和db/db小鼠：先天性瘦素缺乏或受体缺陷，表现为肥胖和脂肪肝，但缺乏炎症和纤维化，需联合高脂饮食或MCD饲料诱导。
- APOE或LDLR敲除小鼠：易发生高胆固醇血症和肝脏炎症，与高脂饮食协同可加速NASH发展。
2. 复合模型
- HFD+CCl₄：高脂饮食联合低剂量CCl₄注射（5%植物油溶液，2周1次），8周后出现脂肪变性、炎症和纤维化，缩短成模周期。
- 基因缺陷+饮食干预：如db/db小鼠喂养MCD饲料，4周后出现严重肝炎和纤维化。
（图片来自网络，侵权即删）
模型评价与选择建议
关键注意事项
- 品系选择：C57BL/6J对高脂饮食敏感，昆明小鼠适应力强但需更长时间成模。
- 饲料配比：需标准化脂肪类型（如棕榈油、起酥油）和胆固醇含量，避免批次差异。
- 病理验证：需结合肝组织HE染色（脂肪变性）、油红O染色（脂滴）、Masson染色（纤维化）及血清ALT/AST检测。
- 伦理与动物福利：避免过度应激，如CCl₄注射需控制剂量和频率。
文献案例
【文章题目】
苓桂术甘汤干预 miR-125a/ERRα/CPT1C 途径影响脂肪酸分解减缓小鼠非酒精性脂肪肝的机制研究
【文献摘要】
目的：探讨苓桂术甘汤对非酒精性脂肪肝小鼠脂质代谢的影响，为临床治疗NAFLD 提供新的治疗策略和实验依据。
方法：C57BL/6J 小鼠作为空白对照组，将 ApoE-/-小鼠分为模型组、苓桂术甘汤低中高剂量组。利用全自动生化分析仪检测小鼠的血脂水平；HE 染色与油红 O 染色判断 NAFLD 小鼠肝脏脂肪变性程度；FFA、TG 试剂盒检测各组小鼠肝脏 FFA、TG 水平变化；RT-qPCR 方法检测miR-125a、ERRα、CPT1C、ACC mRNA 的表达情况；Western Blot 方法检测 ERRα、CPT1C、ACC 蛋白表达情况。
结果：经苓桂术甘汤治疗后，下调了小鼠血清的TC、TG 及 LDL-C 水平（P<0.05）；下调了各组小鼠肝脏 FFA、TG 水平（P<0.05）；miR-125a mRNA 表达升高（P<0.01)，ERRα、CPT1C、ACC mRNA 表达降低（P<0.01)；ERRα、CPT1C、ACC 蛋白表达降低（P<0.05）。
结论：苓桂术甘汤可能通过干预miR-125a/ERRa/CPT1C 途径影响脂肪酸分解进而防治 NAFLD 发展。