ELISA的假阳性，可能是你完全忽略掉的一个因素！

ELISA的假阳性，可能是你完全忽略掉的一个因素！

ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种广泛应用于生物医学领域的检测技术，但其结果容易受到多种因素的干扰，其中类风湿因子（RF）和异嗜性抗体（HA）是常见的干扰因素。本文将详细介绍这些因素对ELISA检测结果的影响，并提供相应的解决方案。

ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种最为频繁使用的固相酶免疫测定方法，其灵敏度高、特异性强、操作简便，主要用于各种抗原和抗体测定。但影响我们ELISA结果的因素众多，包括样本问题，操作因素，试剂盒的选择都最终影响我们实验结果的准确性。今天，我们就分享一个容易忽略的因素。

我们常常借助ELISA方法对患者样本进行检测，尤其是慢性炎症患者，以及自身免疫性疾病患者的血清中存在大量的自身抗体，类风湿性因子（Rheumatoid factor，RF），生物药物，ADA或免疫复合物等，这些物质通常会与我们ELISA检测中的抗体结合，最终造成ELISA实验中更高的背景和非特异性信号，影响我们最终的实验结果。

下图来自于不同疾病患者对于SARS-Cov-2 IgM 的ELISA检测结果的百分比。从左到右分别是多发性硬化症（MS），类风湿性关节炎（RA）阳性或阴性患者，红斑狼疮（SLE）以及infliximab单抗药物治疗的RA患者，从图中可以看到RF阳性的患者样本的ELISA结果更容易产生假阳性信号。

图 来自SARS-Cov-2 IgM ELISA结果。
Frontiers in immunology 12 (2021): 666114.

RF（Rheumatoid factor）类风湿因子

类风湿因子(rheumatoid factor，RF)是一种自身抗体。它的产生是机体将自身变性IgG抗体Fc片段的抗原决定簇作为靶抗原而产生的自身抗体。RF存在于多种疾病中，包括类风湿性关节炎，癌症、慢性感染、结节、混合性结缔组织病、系统性红斑狼疮等。类风湿因子免疫球蛋白的种类有很多，分为IgG-RF、IgA-RF、IgE-RF，IgM-RF。其中IgM-RF最为常见。RF不但能与自身lgG或异体lgG分子反应，还可与其他抗原如核蛋白发生交叉反应。

人血清中IgM、IgG型RF可以在ELISA检测时，与微孔板上包被的的捕获抗体及酶标记的二抗的Fc段直接结合，相当于与检测系统中的抗原竞争与酶标二抗及捕获抗体的结合导致出现的假阳性。如下图所示：

Heterophilic Antibodies异嗜性抗体

嗜异性抗体(Heterophile Antibody，HA)是由已知或未知抗原物质刺激人体免疫系统分泌的，能与动物免疫球蛋白非特异性结合的一种内源性自身抗体。

HA可与其它抗体结合。在人类样本中，异嗜性抗体一般是自身抗体，具有较弱的亲和性和广泛的特异性，一般为多克隆抗体。可以与人类免疫球蛋白、人抗动物免疫球蛋白抗体（HAIA）结合，其中也包括人抗小鼠抗体（HAMA）。

异嗜性抗体能够通过桥接捕获抗体和检测抗体，形成非特异性的免疫复合物，从而导致目标分析物浓度被高估，产生假阳性结果。

如何减少这种干扰

为了解决RF和HA的非特异性结合造成的ELISA假阳性结果，Mabtech厂家推出了ELISA PathRF试剂盒，在检测抗体上引入重组链，并添加专门的RF-block diluent，可以避免干扰的风险。

图：A：三明治夹心ELISA原理。
B：RF和异嗜性抗体交联造成的假阳性信号。
C：利用ELISA PathRF试剂盒来避免干扰

下图为使用ELISA PathRF kit对100份患有类风湿性关节炎患者的血浆样本进行检测。左侧为使用不匹配的ELISA抗体组进行检测，得到高频率的假阳性结果。相比之下，ELISA PathRF则没有获得假阳性信号(右侧)。

MabTech公司简介

MabTech公司，总部位于瑞典，创始于1986年，由瑞典斯德哥尔摩大学免疫系创办。主要致力于ELISpot、ELISA和抗体等免疫试剂的研发与生产。