蒽酮法测定可溶性糖

蒽酮法测定可溶性糖

蒽酮法是测定可溶性糖含量的一种常用方法，其原理是可溶性糖在硫酸作用下生成糠醛，再与蒽酮发生反应生成绿色络合物，通过分光光度计测定吸光度值，从而计算出样品中的可溶性糖含量。本文将详细介绍蒽酮法测定可溶性糖的具体步骤和注意事项。

可溶性糖主要是指单糖（葡萄糖和果糖）和双糖（蔗糖）组成，是植物体内一种很重要的碳水化合物。可溶性糖含量决定了农作物的生长情况，以及果实的品质。可溶性糖广泛存在于植物的根茎和种子中，是人体热量的主要来源，具有较高的营养价值。检测可溶性糖的方法有多种，比如蒽酮比色法、斐林试剂法、气相色谱法、高效液相色谱法等。

蒽酮比色法测可溶性糖含量

检测原理

可溶性糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再和蒽酮发生脱水、缩合反应，生成绿色的络合物，颜色的深浅和糖含量是呈线性关系的。用波长为625nm的分光光度计测定可溶性糖的吸光度值，根据标准曲线，可以计算出样品中的可溶性糖含量。需要注意的是，蒽酮试剂和糖反应呈现的颜色，是随着时间发生变化的。为了准确测定，需要在规定的时间内完成测定，并记录数据。

检测步骤

1. 样品准备
   将样品粉碎研磨，精确称量100mg，置于15ml的离心管中，加入10ml的80%乙醇，盖上盖子，保持在80℃水浴中30min，取出离心。将上清液转移到50ml的烧杯中，重复2次提取。将上述提取液在80℃水浴上，使得乙醇蒸发，只剩下3ml的液体，用蒸馏水定容到25ml。

2. 样品测定
   吸取5ml的糖提取液到25ml容量瓶中，用蒸馏水定容。取2ml稀释液到比色管中，缓缓加入配制好的蒽酮试剂10ml，摇匀30s。放在沸水浴中加热10min，反应完全后，取出放入冷水中迅速冷却，10min后显色稳定。在分光光度计620nm的波长下测定吸光度值，并记录数据，可以重复三次，求取平均值。

3. 标准曲线
   称取1g葡萄糖到1L的容量瓶中，用蒸馏水定容。并从这个溶液中吸取1，2，4，6，8，10ml注入到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容到刻度，摇匀，制成了标准溶液。分别注入到7个比色管中，加入蒽酮试剂，按上法测定吸光度值。以标准溶液的浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，绘制出葡萄糖的标准曲线。

4. 计算结果
   根据测定样品的吸光度值，看是否在标准曲线的范围内。如果超过了范围，需要将样品进行适当的稀释，并重新测定，确保在范围内。根据标准曲线的回归方程，可以计算出样品的含糖量。可溶性糖含量=（回归方程求得糖含量/吸取样品的体积）x提取溶液量x稀释倍数/样品干重，根据情况来确定换算单位。