不同产地何首乌及制何首乌药材活性成分含量与性状分析

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不同产地何首乌及制何首乌药材活性成分含量与性状分析

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来源

http://www.knowcat.cn/x/20241208/912830.html

何首乌是一种传统中药材，被认为具有延年益寿、延缓衰老的功效。近年来，研究者们对其活性成分进行了深入研究，发现其主要活性成分包括蒽醌类、二苯乙烯类等。本文通过高效液相色谱法，对不同产地的生何首乌和制何首乌药材中的二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚等活性成分含量进行了比较分析，并探讨了药材外观性状与活性成分含量的相关性，为中药材的质量评价和合理使用提供了科学依据。

实验材料与方法

仪器与试剂

Waters 600E高效液相色谱系统（美国Waters公司）
JA5003A分析天平（上海精密科学仪器有限公司）
AX205分析天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）
XW-80A微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）
KQ-250E型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）

药材与标准品

何首乌及制何首乌药材（购于天津、辽宁、内蒙古、山西）
标准品：二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚（纯度均＞98%）

试剂

乙腈、甲醇（色谱纯，美国Fisher公司）
水（超纯水，Millipore超纯水净化系统）

测定方法

采用高效液相色谱法测定何首乌中主要有效成分二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量，并进行方法学考察，包括标准曲线的绘制、精密度和加样回收率。

供试品溶液制备

取不同产地何首乌及制何首乌药材各0.1 g，标明编号，置10 m l容量瓶中，精密加入色谱甲醇10 m l，置于超声仪中超声3小时后，冷却至室温，取1 m l置于离心管中，以14 000 rpm速率离心10min，取上清液用0.45μm的微孔滤膜过滤，即得。精密吸取上述各种供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定。

色谱条件

色谱柱Symmetry ShieldTMC18柱（5μm，4.6mm×150mm）；填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-0.05%磷酸梯度洗脱（见表1）；流速：1.0m l/min；检测波长：254 nm；柱温：35℃，进样量为10μl。理论板数（n）按二苯乙烯苷峰计算，应不低于2 000。

表1 流动相梯度洗脱

样品测定

生何首乌样品含量测定

按上述测定方法，测定4种不同产地生何首乌药材中活性成分的含量，细粉编号：生NO.1、生NO.2、生NO.3、生NO.4，结果见图1、表2。

制何首乌样品含量测定

先对4种不同产地制何首乌药材进行性状比较，结果见表3。再按上述测定方法，测定4种不同产地制何首乌药材中活性成分的含量，细粉编号：制NO.1、制NO.2、制NO.3、制NO.4，结果见图2，表3、4。结果表明，不同产地的制何首乌中二苯乙烯苷和蒽醌类成分含量各不相同。

结论

（1）由实验结果可以看出，生何首乌中二苯乙烯苷及蒽醌类成分与制何首乌明显不同。生何首乌中的二苯乙烯苷含量明显高于制何首乌，但游离蒽醌类成分难以检测出，而制何首乌中可检出大黄素及大黄素甲醚等游离蒽醌。这可能是因为何首乌的炮制多采用黑豆汁煎煮法，在煎煮过程中二苯乙烯苷在高温下降解而致使含量降低，在生何首乌中以结合形式存在的蒽醌则会转化为游离蒽醌，从而在制何首乌中得以检出。有研究也比较了何首乌生品和炮制品成分的含量变化，结果发现炮制后降低了二苯乙烯苷的含量，升高了大黄素和大黄素甲醚的含量[3]；随炮制时间延长，对二苯乙烯苷含量也有影响[4]。

图1 生何首乌HPLC谱图（1.二苯乙烯苷）

表2 4种不同产地生何首乌药材含量测定

图2 制何首乌HPLC谱图（1.二苯乙烯苷；2.大黄素；3.大黄素甲醚）
表3 4种不同产地制何首乌药材性状比较结果

表4 4种不同产地制何首乌药材含量测定

（2）实验结果还表明，制NO.1样品（色浅，片状）大黄素含量明显少于其他样品；制NO.2样品（色深，块状）大黄素偏高；制NO.3样品二苯乙烯苷含量偏高；制NO.4样品（乌黑色，块状）二苯乙烯苷含量偏低，但其他成分都偏高。因此，制何首乌外观性状与其所含的活性成分含量有一定相关性：若制何首乌外观颜色浅，丝络明显，其中含有的二苯乙烯苷较高，但大黄素含量较低；若制何首乌外观颜色深，丝络不明显，则二苯乙烯苷含量较低且游离蒽醌类含量较高。

（3）本研究以生、制药材为切入点，通过对生、制何首乌药材中多种活性成分含量进行比较，并分析药材外观性状与活性成分含量的相关性，为何首乌药材质量评价提供科学依据；同时，也提示我们需加强何首乌药材炮制工艺的控制，为何首乌药材的合理使用建立标准。