ELISA检测试剂盒使用指南：详细步骤一览

ELISA检测试剂盒使用指南：详细步骤一览

酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种广泛使用的生物化学分析技术，主要用于检测和定量样本中的特定抗原或抗体。本文将详细介绍如何使用Elisa检测试剂盒，以确保实验的准确性和有效性。

实验前准备

1. 试剂平衡：实验前需将所有试剂平衡至室温，包括样本和TMB，这对于保证实验结果的准确性至关重要。
2. 样本处理：根据检测目的采集合适的样本，如血清、血浆或细胞培养上清液，并进行预处理，如离心、过滤等，以去除杂质和细胞碎片。

操作步骤

1. 加样：在酶标板的相应孔中加入待检样本和对照样本，一般每孔加入100 μL左右的样本或对照液，注意避免产生气泡。
2. 孵育：将酶标板放入孵育箱中，在37℃下孵育30分钟至1小时，以确保样本中的抗原与酶标板上的抗体以及标记抗体能够充分结合。
3. 洗涤：孵育结束后，甩掉孔内液体，然后在每孔中加入洗涤液，一般每孔加入300 μL左右，浸泡1-2分钟后甩掉，如此反复洗涤3-5次，以去除未结合的物质。
4. 显色：在洗涤后的酶标板每孔中加入底物溶液，一般每孔加入100 μL左右，然后将酶标板放入孵育箱中，在37℃避光孵育10-30分钟，使底物在酶的催化作用下发生显色反应。
5. 终止反应：当显色达到适当程度时，在每孔中加入终止液，一般每孔加入50 μL左右，终止底物的反应。
6. 结果读取：使用酶标仪在相应的波长下读取酶标板各孔的吸光度值，根据阳性对照和阴性对照的结果，判断样本是否为阳性以及抗原或抗体的含量。

注意事项

1. 复孔操作：强烈建议每个样本包括标准品做复孔，以求平均值，确保实验结果的准确性，并对自己的操作进行评估。
2. 孵育和振荡：在孵育时，一定要用微孔板振荡器振荡，这有利于抗原抗体的充分结合。
3. 洗板：建议按照说明书操作，每次洗涤至少洗液浸泡30秒，重复6次，以确保非特异性结合的物质被洗净。
4. 显色时间控制：显色时间控制在5-30分钟，根据肉眼观察和仪器判断来确定大致的显色时间。

结论

正确使用Elisa检测试剂盒，遵循上述步骤和注意事项，可以有效进行抗原或抗体的定量分析。通过这种精确的实验方法，科研人员可以更好地理解生物分子的动态变化，为疾病诊断和科学研究提供重要数据。

本文原文来自网易新闻