人参皂苷类中药如何检测？看这一篇就够了~

创作时间:

2025-01-22 03:14:09

作者:

@小白创作中心

人参皂苷类中药如何检测？看这一篇就够了~

人参皂苷是一种重要的固醇类化合物，具有多种生物活性和药理作用。然而，由于人参皂苷Rg1和Re的保留时间接近，导致分离度不够，一直是困扰分析人员的难点问题。本文基于2020版《中国药典》，通过系统地考察色谱柱类型、柱长和流速等因素，提出了解决这一问题的有效方案。

筛选思路

中国药典中人参皂苷类实验属于标准方法重现，对于Rg1和Re分离度不够的问题，主要通过筛选色谱柱来解决。药典规定使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（C18色谱柱），但由于键合工艺、键合相支链基团、封尾基团、色谱柱规格等差异，常导致保留行为不同。本文考察了色谱柱类型、柱长、流速对Rg1和Re分离度的影响。

色谱柱类型对分离度的影响

首先查看Alphasil VC-C18上Rg1和Re出峰情况，发现Rg1先出峰。通过计算Rg1和Re的疏水性，发现其疏水性的大小与出峰顺序相悖，表明当前体系下出峰顺序不单单基于疏水作用力。查看Rg1和Re结构式可知，两者都含有糖单元，保留强弱是糖单元的数量带来的亲水作用力差异引起。

通过比较Alphasil VC-C18和Alphasil VC-C18AQ的分离结果，我们发现Alphasil VC-C18AQ整体保留时间会更长，这是因为该色谱柱键合相是十八烷基硅烷内嵌酰胺基，而酰胺基是亲水基团，会进一步提高色谱柱与Rg1和Re间的作用力。

柱长对分离度的影响

本文对色谱柱长度进行了考察，结果发现了一个有趣的现象：150mm色谱柱Rg1和Re分离效果优于250mm的色谱柱。这个结果与常规经验相悖，因为通常认为相同条件下，色谱柱越长，化合物分离度应该越好。

针对上述现象，我们进行了探究。色谱分离过程是化合物进入色谱柱后在固定相和流动相之间进行分配，多个组分实现分离就是借助不同化合物K'差异。在梯度洗脱过程中，K'不是恒定值，会随流动相的变化而改变，所以梯度洗脱中常用K'的平均值作为梯度的容量因子。

式中Vm为色谱柱体积，F为流速，tG/ ΔΦ与梯度相关，S与化合物有关，已知小分子样品的S值大约为4。因此，当在给定的梯度条件下，化合物的容量因子只与流速F和色谱柱体积Vm有关。

色谱分析中我们习惯根据K'改变后，化合物间相对保留行为是否改变将化合物分为“常规样品”和“非常规样品”。其中常规样品是K'改变后，相对保留行为不发生改变，非常规样品刚好相反。我们再回到这个实验，发现色谱柱长度从150mm变为250mm后，Rg1和Re分离度变差，说明Rg1和Re属于非常规样品范畴。为了验证这一结论，我们设计实验，改变流速F，考察K'减小后Rg1和Re分离度是否也会变差。结果如图3所示，我们发现1mL/min流速下分离度小于1.3mL/min，与色谱柱长度改变后得到的分离度变化趋势一致。