免疫荧光技术概览与实验操作指南

免疫荧光技术概览与实验操作指南

免疫荧光技术是生物医学研究中一项强大而广泛应用的工具，它利用特异性标记的抗体来高灵敏地探测和定位样本中的特定蛋白质。这项技术的核心基于抗体与抗原间的特异性结合，涉及以下关键步骤：目标抗原与抗体结合，随后荧光标记的二抗抗体与复合物结合，从而揭示目标分子的位置和分布。

实验前准备与操作技巧详解：

1. 细胞培养与涂片制作：

• 对于贴壁生长细胞，需提前将它们接种在预处理的盖玻片上，待细胞单层形成后清洗并取出玻片。悬浮细胞则需离心后，用PBS洗涤，通过离心或直接涂片机制备片。
  固定：**
• 根据实验需求选择合适的固定剂固定细胞，固定后，细胞可在PBS中含叠氮环境下4℃保存长达3个月，正式实验前需PBS洗涤三次，每次5分钟。

1. 通透处理：

• 若采用甲醛等交联剂固定，需进行通透以确保抗体能接触抗原。选择通透剂需考虑抗原特性，通透时长约5至15分钟，之后再用PBS洗涤三次，每次5分钟。

1. 封闭：

• 使用封闭液封闭细胞，时间大约30分钟，减少非特异性结合。

1. 一抗结合：

• 室温下孵育1小时或4℃过夜，之后PBST漂洗三次，每次5分钟。

1. 二抗结合：

• 间接免疫荧光需二抗，室温避光下孵育1小时，BST漂洗后，每次5分钟，最后用蒸馏水冲洗。

1. 封片及观测：

• 添加封片剂，封片后，荧光显微镜下观察并记录结果。

通过遵循上述细致的操作流程，可以有效地执行免疫荧光实验，确保结果的准确性和重复性，为深入的生物医学研究提供宝贵的视觉信息。