电泳实验中marker的三大作用
电泳实验中marker的三大作用
在分子生物学实验中，电泳是一种常用的分离和分析生物大分子（如DNA、RNA和蛋白质）的技术。在这个过程中，marker（分子量标准参照物）扮演着至关重要的角色。本文将详细介绍marker在电泳实验中的三大作用及其具体应用。
一、确定目的片段大小
原理：Marker 是由一系列已知分子量大小的 DNA（或蛋白质等，取决于电泳类型）片段组成。在电泳过程中，这些片段会根据其分子量大小在凝胶中迁移。因为 DNA（或蛋白质）在凝胶中的迁移率与其分子量的对数呈反比，所以通过将目的 DNA（或蛋白质）条带与 marker 条带的迁移位置进行比较，就可以大致估算目的片段的分子量。
例如，在 DNA 琼脂糖凝胶电泳中，如果已知 marker 中某一条带的分子量为 500bp，在相同电泳条件下，目的 DNA 条带的迁移位置与该 500bp 的 marker 条带相同，那么就可以推断目的 DNA 的分子量约为 500bp。
二、监测电泳进程和效率
原理：Marker 中的不同片段会在电泳过程中逐渐分离，形成一系列条带。这些条带可以作为一个直观的参考，用于判断电泳是否正常进行。正常情况下，marker 的条带应该按照分子量大小依次排列，并且条带之间的距离应该是合理的。如果 marker 的条带出现模糊、拖尾或者无法正常分离的情况，就可能提示电泳过程存在问题，如凝胶质量不佳、电泳缓冲液不合适、电压不稳定等。
例如，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS - PAGE）用于分离蛋白质时，正常情况下，蛋白质 marker 的条带应该清晰、锐利。如果发现 marker 条带模糊，可能是因为加样量过大、凝胶聚合不完全或者电泳时间过长等原因，此时可以相应地调整实验条件。
三、评估转膜效果（在涉及转膜的实验中）
原理：在一些电泳实验（如 Western blotting）后，需要将凝胶中的蛋白质或核酸转移到膜上进行后续检测。Marker 可以帮助判断转膜是否成功以及转膜的效率。如果在膜上能够检测到 marker 的条带，且条带位置和强度与凝胶中的情况相符，那么就说明转膜过程是成功的；如果膜上的 marker 条带很弱或者缺失，可能提示转膜不完全或者效率低下。
例如，在 Western blotting 实验中，使用预染的蛋白质 marker，这种 marker 在电泳过程中可以看到颜色，转膜后在膜上也可以看到颜色标记。如果在膜上看不到 marker 的颜色条带，就需要检查转膜装置是否正确组装、转膜时间和电压是否合适等。