色谱、质谱流动相添加剂：缓冲盐的使用指南

色谱、质谱流动相添加剂：缓冲盐的使用指南

在色谱分析过程中，缓冲盐的使用是一个关键环节。不当使用缓冲盐可能会导致柱压升高、柱效下降以及化合物保留时间变化等问题。本文将详细介绍缓冲盐的作用、种类、正确使用方法以及注意事项，帮助实验工作者更好地掌握这一技术要点。

1. 缓冲盐的基本概念

缓冲盐是指对pH有缓冲能力的盐，能够让pH维持在一个恒定的数值。在色谱分析中，缓冲盐主要用于调节流动相的pH值，特别是在分析具有离子化倾向的样品时。

2. 缓冲盐的应用场景

• 何时应用缓冲盐：当样品或样品中的关键杂质具有离子化倾向时，使用缓冲盐可以控制分子状态和离子状态的比例，避免峰拖尾、分叉和变形。
• pH范围选择：通常建议将pH范围控制在2到4之间，因为这个范围内的保留时间对pH的微小改变稳定性最高。

3. 常见的缓冲盐类型

• 甲酸盐：常用甲酸铵，溶解度好，兼容液质联用，但离子强度较低，易吸潮。
• 乙酸盐：常见为乙酸铵，与甲酸盐类似，离子强度也不高。
• 磷酸盐：常用磷酸钠盐和钾盐，能提供较高离子强度，但不兼容质谱，对色谱柱损伤较大。

4. 缓冲盐使用不当的影响

• 柱压升高：缓冲盐析出堵塞孔隙，阻碍传质。
• 保留时间变化：未冲洗干净导致色谱柱内残留盐。
• 柱效下降：缓冲盐渗入键合相深处或凝结在表面，损害硅胶基体。

5. 缓冲盐的正确使用方法

• 使用前处理：用不含缓冲盐的流动相冲洗至基线平稳。
• 使用后处理：用不含缓冲盐的流动相冲洗约30分钟，长期保存需加纯有机溶剂冲洗。

6. 使用缓冲液的注意事项

• 避免使用盐酸盐，因为其对钢质有腐蚀作用。
• 缓冲液现配现用，防止细菌生长。
• 实验后不可直接用有机溶剂过度，可用95:5的水甲醇冲洗。
• 注意控制pH范围，及时观察接头处析出情况。
• 清洗液路和柱子时可加热至30摄氏度。
• 选择可靠的试剂，避免杂质干扰。

7. 流动相流速的选择

• 对于4.6mm内径的色谱柱，推荐流速为1ml/min。
• 对于4.0mm内径的色谱柱，推荐流速为0.8ml/min。

8. 总结

正确使用缓冲盐对于色谱分析至关重要，既能防止缓冲盐析出，又能延长色谱柱使用寿命。使用原则可概括为：“用前要过滤，用后需冲洗”。