SKOV3细胞培养详细教程干货解析

SKOV3细胞培养详细教程干货解析

细胞培养是个看似简单，实则很费心力的工作，今天我们来捋捋这其中的细节，事无巨细那种的，欢迎大家一起交流讨论。

SKOV3细胞特点

SK-OV-3 (人卵巢癌细胞) (STR鉴定正确), 细胞简称：SK-OV-3 种属来源：人, 细胞形态：贴壁，上皮细胞样，**McCoy's 5A＋10% FBS＋1% P/S **传代比例：1:2-1:4，每2-3天换液一次。
传代周期：48-72 h, 培养条件：气相： 5%CO2，温度：37℃，冻存条件：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO，液氮储存。

细胞复苏（原则缓冻速溶）：

1. 准备37℃水浴；
2. 从液氮中取出细胞；
3. 迅速置37℃水浴，1min内融化；
4. 打开培养基瓶盖（开盖前酒精棉擦拭盖口边缘），培养基瓶放在瓶架上，瓶盖放在“非工作区”，以免工作时污染；
5. 摇出或用取物钳（用前酒精棉擦拭）取出移液管（头部不能接触任何物品）；
6. 用移液管向培养皿（瓶）中加10ml新鲜培养基；
7. 摇出或用取物钳（用前酒精棉擦拭）取出吸管，安上吸头，插入灭菌离心管中（吸管头部不能接触任何物品）；
8. 用酒精棉擦拭冻存管；
9. 开盖，将管内液吸入含10ml新鲜培养基的培养皿（瓶），摇匀。
10. 放入CO2培养箱培养，24h后换液。

贴壁细胞的传代培养：

1. 打开培养皿（瓶）盖（盖放在“非工作区”， 盖、培养皿口不能接触任何物品），倾斜吸出（可用真空泵）所有的培养基；
2. 加入2ml PBS洗涤，倾斜吸出PBS；
3. 加入0.5ml-1ml胰酶溶液，混匀，倾斜吸出多余胰酶，不必吸干；
4. 37℃消化1-2min左右，显微镜下细胞变圆。倾斜培养皿看到少量细胞自由流动即可；
5. 用吸管加入约4ml完全培养基，用吸管将细胞吹打下来；
6. 将细胞悬液分配至新的培养瓶（皿）中，再用移液管加入8ml新鲜的培养基，盖盖。
7. 收培养基瓶，盖盖；
8. 收离心管，吸管，冲洗；
9. 75％酒精擦台面，冲洗废液缸；
10. 关闭超净工作台。

冻存：

1. 接贴壁细胞的传代培养中第4步（避免消化时间过长，否则会影响冻存质量）；
2. 用移液管加2ml冻存液，用吸管将细胞吹打下来；
3. 移入2ml冻存管（1ml/管），标记冻存管；
4. 置于液氮液面上；
5. 12－24h后放入液氮，记录。

完全培养基配制：

基础培养基＋胎牛血清10％＋双抗溶液1％
胰酶溶液：0.25％胰酶＋0.02％EDTA-Na2
冻存液：55%胎牛血清+40%基础培养基+5%DMSO

注意事项：

1. 培养细胞前，务必查下细胞的培养条件，是需要什么样的基础培养基，除了加FBS，还要不要加胰岛素，非必须氨基酸等等。
2. 保种用的耗材尽量用无菌一次性的，毕竟细胞种子比较珍贵。
3. 细胞培养注意要点

• SK-OV-3细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物包括白喉毒素、顺铂和阿霉素均耐受。
• 在免疫抑制小鼠中致瘤，可形成与卵巢原位癌一致的中度分化腺癌。

本文原文来自环凯，转载自“细胞铲屎官”公众号