一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法与流程

一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法与流程

本发明涉及溶菌酶提取，具体为一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法。

背景技术

溶菌酶又称胞壁质酶或n-乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一种能水解细菌中黏多糖的碱性酶。溶菌酶主要通过破坏细胞壁中的n-乙酰胞壁酸和n-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解，溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复合体，使病毒失活。该酶广泛存在于人体多种组织中，鸟类和家禽的蛋清、哺乳动物的泪、唾液、血浆、乳汁等液体，以及微生物也含此酶，其中以蛋清含量最为丰富。根据其来源的不同，可以将其分为四类，分别是植物溶菌酶、动物溶菌酶、微生物溶菌酶以及蛋清溶菌酶。

现有技术中，公告号为CN103555691A的专利公开了一种鸡蛋清中溶菌酶的提取方法，该方法以鸡蛋清为原料，在4℃-10℃下用1%的乙酸搅拌调节pH至4-5，静置12-24小时，离心去除残渣，然后将离心液调节pH至6-7，静置5小时，再次离心去除残渣，最后将离心液在50℃下真空浓缩脱水，并经冷冻干燥得到溶菌酶含量大于90%，活力大于12000U的溶菌酶产品。然而，该方法每次能制取的溶酶菌质量有限，且得到的溶酶菌存储使用较为不便。

技术实现思路

本发明的目的在于提供一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，以解决现有技术中溶菌酶提取方法每次能制取的溶酶菌质量有限，且得到的溶酶菌存储使用较为不便的问题。

本发明提供的一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，包括以下步骤：

1. 步骤一：以蛋清为原材料，在5—10℃下，将新鲜蛋清540kg加入到已处理好的80kg 724树脂中，搅拌吸附6h，在0—5℃静置过夜；

2. 步骤二：倾出上层蛋清，树脂离心甩干，用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白，然后将树脂装入柱内，用0.15mol/L、pH＝6.5醋酸缓冲溶液约150L洗涤树脂，再用约600L的10%氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液；

3. 步骤三：将洗脱液在制备装置上用盐酸溶液调pH至6.0，在调pH值的过程中不停地搅拌；

4. 步骤四：有少量的乳白色沉淀析出，然后加入15%聚丙烯酸，立即有白色沉淀析出，加至pH值为3.0为止，静置17个小时进行静析，得到粘附于底部的乳白色胶状物；

5. 步骤五：将前步得到的溶菌酶聚丙烯酸凝聚物，加入少量蒸馏水，并用0.5mol/L的碳酸钠，将其溶解，转移后，将pH值调到9.5，加入5%CaCl2溶液将溶菌酶聚丙烯酸解离，至无沉淀析出，然后过滤，得到澄清溶液；

6. 步骤六：将所得澄清溶液加入5%的NaCl溶液搅拌均匀，放入冰箱调温度为0℃，待有晶体析出后，用无水乙醇洗涤数次，置恒温培养箱中40℃条件下干燥称重。

其中，制备装置包括制备平台，制备平台的下方设置有伸缩式液压缸，制备平台两侧外壁的支板上分别设置有洗涤池和第二溶液桶，制备平台的内部方槽中设置有活动平台，活动平台的上端摆放有第一溶液桶，制备平台的上端设置有支架板，支架板的上端设置有顶台座，支架板与制备平台和顶台座一体成型设置，支架板的顶部设置有驱动电机。

制备装置的结构特征

1. 洗涤池的一侧外壁上设置有抽液泵，抽液泵的进液端和出液端上分别设置有抽液管和注液管，抽液管和注液管均与洗涤池的内部连通设置，抽液管与洗涤池连接的位置上设置有内衬滤网，洗涤池的内壁上安装有底板框，底板框的上端边沿位置上设置有安装块，安装块与底板框一体成型设置，安装块通过螺钉与洗涤池的内壁固定连接，底板框的中心位置上设置有中心圆口，中心圆口与底板框一体成型设置。

2. 洗涤池的内部安装有装载框，装载框的顶部边沿位置上设置有承载沿框，承载沿框与装载框一体成型设置，承载沿框的上端设置有两个把手杆，把手杆与承载沿框一体成型设置，装载框的内部设置有透液网，透液网与装载框一体成型设置。

3. 第一溶液桶和第二溶液桶的前端面上均设置有pH检测仪，第一溶液桶和第二溶液桶的内壁上均通过螺钉安装有定位套箍，定位套箍上摆放安装有检测探头，检测探头与pH检测仪之间设置有探头接线。

4. 第一溶液桶的底部安装有底接框，第二溶液桶的内部安装有溶液滤网。

5. 驱动电机的下端设置有电机驱动轴，电机驱动轴的下方安装有中心转轴，中心转轴的外壁上设置有延伸杆，延伸杆的一端设置有搅拌杆，延伸杆和搅拌杆均与中心转轴一体成型设置。

6. 电机驱动轴的下端和中心转轴的上端均设置有连接盘，两个连接盘分别与电机驱动轴和中心转轴一体成型设置，两个连接盘通过螺钉固定连接。

7. 洗涤池的内壁上设置有插接壁槽，插接壁槽与洗涤池一体成型设置，插接壁槽的内部安装有内沿板，承载沿框与内沿板接触挂接。

8. 活动平台的底部设置有连接底盘，连接底盘与活动平台一体成型设置，伸缩式液压缸的活塞杆通过螺钉与连接底盘固定连接。

9. 活动平台的上端设置有摆放凹槽，摆放凹槽与活动平台一体成型设置，第一溶液桶通过摆放凹槽与活动平台定位摆放。

有益效果

1. 本发明可以大质量制备溶菌酶，将新鲜蛋清540kg加入到已处理好的80kg 724树脂中，并采用结晶析出的方式得到固定溶菌酶产物，便于后期的收纳和称量使用。整个制备过程在设计的制备装置中进行，制备操作简单，使用方便，克服了现有的溶菌酶提取方法每次能制取的溶酶菌质量有限，且得到的溶酶菌存储使用较为不便的问题。

2. 待有晶体析出后，用无水乙醇洗涤数次，洗涤的过程中，析出的晶体摆放在装载框的内部，抽液泵使得无水乙醇进行循环回流，通过内衬滤网对无水乙醇中的杂质进行过滤，达到节约无水乙醇消耗的目的。

技术特征

1. 一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

2. 根据权利要求1所述的一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，其特征在于：所述洗涤池的一侧外壁上设置有抽液泵，抽液泵的进液端和出液端上分别设置有抽液管和注液管，抽液管和注液管均与洗涤池的内部连通设置，抽液管与洗涤池连接的位置上设置有内衬滤网，洗涤池的内壁上安装有底板框，底板框的上端边沿位置上设置有安装块，安装块与底板框一体成型设置，安装块通过螺钉与洗涤池的内壁固定连接，底板框的中心位置上设置有中心圆口，中心圆口与底板框一体成型设置。

3. 根据权利要求2所述的一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，其特征在于：所述洗涤池的内部安装有装载框，装载框的顶部边沿位置上设置有承载沿框，承载沿框与装载框一体成型设置，承载沿框的上端设置有两个把手杆，把手杆与承载沿框一体成型设置，装载框的内部设置有透液网，透液网与装载框一体成型设置。

4. 根据权利要求3所述的一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，其特征在于：所述第一溶液桶和第二溶液桶的前端面上均设置有pH检测仪，第一溶液桶和第二溶液桶的内壁上均通过螺钉安装有定位套箍，定位套箍上摆放安装有检测探头，检测探头与pH检测仪之间设置有探头接线。

5. 根据权利要求4所述的一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，其特征在于：所述第一溶液桶的底部安装有底接框，第二溶液桶的内部安装有溶液滤网。

6. 根据权利要求5所述的一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，其特征在于：所述驱动电机的下端设置有电机驱动轴，电机驱动轴的下方安装有中心转轴，中心转轴的外壁上设置有延伸杆，延伸杆的一端设置有搅拌杆，延伸杆和搅拌杆均与中心转轴一体成型设置。

7. 根据权利要求6所述的一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，其特征在于：所述电机驱动轴的下端和中心转轴的上端均设置有连接盘，两个连接盘分别与电机驱动轴和中心转轴一体成型设置，两个连接盘通过螺钉固定连接。

8. 根据权利要求7所述的一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，其特征在于：所述洗涤池的内壁上设置有插接壁槽，插接壁槽与洗涤池一体成型设置，插接壁槽的内部安装有内沿板，承载沿框与内沿板接触挂接。

9. 根据权利要求8所述的一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，其特征在于：所述活动平台的底部设置有连接底盘，连接底盘与活动平台一体成型设置，伸缩式液压缸的活塞杆通过螺钉与连接底盘固定连接。

10. 根据权利要求9所述的一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，其特征在于：所述活动平台的上端设置有摆放凹槽，摆放凹槽与活动平台一体成型设置，第一溶液桶通过摆放凹槽与活动平台定位摆放。

技术研发信息

本发明公开了一种鸡蛋清中溶菌酶提取制备方法，涉及溶菌酶提取技术领域，为解决现有的溶菌酶提取方法每次能制取的溶酶菌质量有限，且得到的溶酶菌存储使用较为不便的问题。该方法包括以下步骤：以蛋清为原材料，在5—10℃下，将新鲜蛋清540kg加入到已处理好的80kg 724树脂中，搅拌吸附6h，在0—5℃静置过夜；倾出上层蛋清，树脂离心甩干，用蒸馏水反复洗去黏附的卵蛋白，然后将树脂装入柱内，用0.15mol/L、pH＝6.5醋酸缓冲溶液约150L洗涤树脂，再用约600L的10%氯化钠溶液洗脱，收集洗脱液；将洗脱液在制备装置上用盐酸溶液调pH至6.0，在调pH值的过程中不停地搅拌。

技术研发人员：钟雄明、杨庆峰、谢良、林凤扬
受保护的技术使用者：苏州欧福蛋业股份有限公司