国内测定水质叶绿素a的方法有哪些（水质叶绿素a的检测步骤）

国内测定水质叶绿素a的方法有哪些（水质叶绿素a的检测步骤）

叶绿素a含量是评价水体富营养化的关键指标之一。近年来，随着环境监测技术的发展，叶绿素a的检测标准也在不断完善。本文将详细介绍国内常用的三种水质叶绿素a检测方法，包括《水和废水监测分析方法（第四版）》、《湖泊富营养化调查规范》和分光光度法，帮助读者全面了解每种方法的具体操作步骤。

1.《水和废水监测分析方法（第四版）》

抽滤

在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜，倒入定量体积的水样进行抽滤，抽滤时负压不能超过50kPa。

研磨

水样过滤后，取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6～8h后放入组织研磨器中，加入少量碳酸镁粉末及2～3ml90%丙酮，充分研磨，提取叶绿素a。

离心

用离心机（3000～4000r/min）离心10min。将上清液倒入5ml或10ml容量瓶中。再用2～3ml的90%丙酮，继续研磨提取，离心10min。

测定

将上清液再转入容量瓶中，重复1～2次，用90%的丙酮定容为5ml或10ml，摇匀。1cm比色皿，90%丙酮为参比溶液，750、663、645、630nm处测定吸光度值。

2.《湖泊富营养化调查规范》

过滤

在过滤装置上装好玻璃纤维滤膜，根据水体的营养状态确定取样体积，用量量筒量取一定量的混匀样品，进行过滤，最后用少量蒸馏水冲洗滤器壁。

研磨

将滤膜剪碎，放入研钵或匀浆器中，加入68ml90%丙酮，在5001000r/min转速下研磨13min，滤膜完全磨成糊状后，将匀浆器中的样品倒入离心管中，再用少许90%丙酮冲洗匀浆器23次，倒入离心管中，盖上管塞，摇动后置于黑暗低温处（冰箱）静置，提取时间不少于8小时和不多于20小时。

离心

将离心管放入离心机中，在30004000r/min转速下离心1015分钟，将上清液移入具刻度离心管，再加少量90%丙酮于原抽提用的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，再将上清液合并，此操作应重复1~2次，直至沉淀物不含色素为止，最后将提取后的上清液定容到10ml。

测定

测定665nm和750nm处的吸光度，用0.1N盐酸酸化后再测定750和665 nm处的吸光度，代入公式计算叶绿素a和脱镁叶绿素a的浓度。

3.分光光度法

过滤

在过滤装置上装好玻璃纤维滤膜，根据水体的营养状态确定取样体积，用量量筒量取一定量的混匀样品，进行过滤，最后用少量蒸馏水冲洗滤器壁。

研磨

将样品滤膜放置于研磨装置中，加入 34mL丙酮溶液，研磨至糊状。补加34mL丙酮溶液，继续研磨，并重复1~2次，保证充分研磨5min以上。将完全破碎后的细胞提取液转移至玻璃刻度离心管中，用丙酮溶液冲洗研钵及研磨杵，一并转移入离心管中，定容至10Ml。

浸泡提取

将离心管中的研磨提取液充分震荡混匀后，用铝箔包好，放置于4摄氏度下避光浸泡提取2小时以上。

离心

将离心管放入离心机，以3000~4000r/min的速度离心10min，然后用针式滤器过滤上清液得到叶绿素a的丙酮提取液待测。

空白试样的配置

用实验用水按照与试样的制备相同的步骤进行实验室空白试样的制备。

测定

将试样转移至比色皿中，以丙酮溶液为参比溶液，于波长750nm、664nm、647nm、630nm处测吸光度。

大家都知道水体富营养化主要的表现就是水中藻类大量的繁殖，而所有的藻类都含有叶绿素a，因此通过水体中叶绿素a的含量高低可以判断该水中藻类的数量。