杂交瘤细胞的制备与筛选：从基础到应用

杂交瘤细胞的制备与筛选：从基础到应用

杂交瘤细胞是生物医学研究中的重要工具，它结合了癌细胞的无限增殖能力和免疫细胞的抗原识别能力。本文将详细介绍杂交瘤细胞的制备过程、筛选方法以及无血清培养基的优势，帮助读者深入了解这一关键技术。

杂交瘤细胞的制备

1. 制备免疫小鼠：首先选择合适的抗原对小鼠进行免疫，多次注射以刺激小鼠产生特异性抗体。
2. 提取脾细胞：免疫后的小鼠脾脏含有产生抗体的B细胞，将脾脏取出并制备成单细胞悬液。
3. 制备骨髓瘤细胞：选择合适的骨髓瘤细胞系，这些细胞能够在HAT培养基中存活。
4. 细胞融合：将脾细胞与骨髓瘤细胞混合，并使用聚乙二醇（PEG）等融合剂促使细胞融合，形成杂交瘤细胞。

杂交瘤细胞的筛选

1. 选择性培养：将融合后的细胞置于选择性培养基中，通常含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷（HAT）或者HT的培养基。只有成功融合的杂交瘤细胞能够在HAT/HT培养基中生存，因为它们继承了骨髓瘤细胞的耐药性，同时保留了脾细胞产生抗体的能力。
2. 采用ELISA法进行初步筛选：ELISA法是一种基于抗原-抗体反应的杂交瘤细胞筛选方法。它的原理是将抗原涂在微孔板上，然后加入杂交瘤细胞培养液，使抗体与抗原结合。然后，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，使其与抗体结合。最后，加入底物，使其与酶结合，产生发光信号。通过检测发光信号的强度，就可以确定杂交瘤细胞的抗体产生情况。
3. 采用限稀稀释法克隆化培养：限稀稀释法是一种基于单克隆细胞的杂交瘤细胞筛选方法。它的原理是将杂交瘤细胞进行有限稀释，使每个孔中只有一个细胞，然后进行培养。在这种条件下，只有单克隆细胞能够生长下去，而多克隆细胞则会死亡。这样，就可以筛选出单克隆的杂交瘤细胞，保证抗体的均一性。
4. 抗体特异性检测：对克隆化培养的细胞产生的抗体进行进一步的特异性检测，确保其针对特定抗原的特异性。
5. 扩大培养：将筛选出的具有所需特异性抗体的杂交瘤细胞进行扩大培养，以获得足够数量的抗体用于后续研究或应用。
6. 冻存保种：将筛选出的杂交瘤细胞进行冻存，以便长期保存和使用。

杂交瘤无血清培养基的优势

1. 提高了培养的稳定性和重复性，因为无血清培养基避免了血清批次间差异带来的影响。
2. 减少了潜在的生物安全风险，因为血清可能含有未知的病原体。
3. 有利于下游产品的纯化和分析，因为无血清培养基成分明了，不会含有过多的激素及维生素干扰
4. 添加了细胞所需蛋白组分提高了细胞生长和产物表达的效率，某些细胞株在无血清条件下生长得更好。
5. 促进了法规遵从性，无血清培养基更符合当前的药品生产规范要求。