掌握配制培养基制备、灭菌与消毒的一般方法和步骤

掌握配制培养基制备、灭菌与消毒的一般方法和步骤

培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。掌握培养基的配制、灭菌与消毒技术是微生物学研究的基础。本文将详细介绍培养基的配制原理、方法和步骤，以及各种消毒灭菌技术。

培养基的配制

原理与原则

培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。配制培养基时需要遵循以下原则：

• 目的确立明确
• 营养成分协调
• 控制pH、渗透压等条件
• 经济节约

方法与步骤

配制培养基的一般方法包括：

1. 查阅相关文献
2. 精心设计配方
3. 通过试验比较优化配方

具体步骤如下：

1. 称量
2. 熔化
3. 调节pH
4. 过滤
5. 分装
6. 加塞
7. 包扎
8. 灭菌
9. 冷却
10. 无菌检查

培养基的种类

培养基可以根据其成分、物理状态和用途进行分类：

按成分的不同划分：

• 天然培养基
• 合成培养基
• 半合成培养基

按物理状态划分：

• 固体培养基
• 液体培养基
• 半固体培养基

按用途划分：

• 基础培养基
• 加富培养基
• 鉴别培养基
• 选择培养基

常见培养基配方

• 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15～20g，水1000mL，pH 7.0～7.2
• 高氏1号培养基：可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂15～20g，水1000mL，pH 7.4～7.6
• 查氏合成培养基：NaNO3 3g，K2HPO4 1g，KCl 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4 0.01g，蔗糖 30g，H2O 1000ml，pH自然
• 麦芽汁培养基：干麦芽粉加4倍水，在50-60℃保温糖化3-4小时，调整糖液浓度，煮沸后过滤，调pH为6.0

消毒与灭菌

概念区分

• 消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体
• 灭菌：杀灭一切微生物的营养体、芽胞和孢子

方法分类

• 物理方法：加热、过滤、辐射
• 化学方法：使用化学试剂抑制或杀灭微生物

加热法

• 干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌
• 湿热法：高压蒸汽灭菌法、常压蒸汽灭菌、煮沸灭菌法、超高温杀菌

过滤除菌

• 原理：介质在有压力时阻隔微生物
• 适用范围：血清、抗生素及糖溶液等
• 设备：蔡氏过滤器、滤膜过滤器

辐射灭菌

• 原理：紫外线波长在200－300nm，以265-266nm杀菌力强
• 应用：无菌室、医院等
• 注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用

化学药品灭菌

• 原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能
• 常用化学杀菌剂：乙醇、醋酸、石碳酸、福尔马林、高锰酸钾、新洁尔灭等

微生物的分离、纯化及培养技术

分离与纯化

从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。

常用方法

• 单细胞挑取法
• 稀释涂布平板法
• 稀释混合平板法
• 平板划线法

稀释涂布平板法

1. 倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基、高氏I号培养基、查氏培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板
2. 制备污水稀释液：10g土样加入90ml无菌水，振摇20min，制成不同稀释度
3. 涂布：将稀释度标记在平板底面，吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布
4. 培养：高氏I号和查氏倒置培养于28℃培养箱中培养3-5days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37℃培养1-2days
5. 挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存

平板划线法

1. 倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期
2. 划线方法

稀释混合平板法

1. 先加菌
2. 倒平板时注意培养基温度
3. 混合均匀

微生物培养技术

1. 斜面接种
2. 液体培养基接种
3. 穿刺接种

将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培养箱中培养，将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保存。