Stbl3感受态细胞的简要说明

Stbl3感受态细胞的简要说明

Stbl3感受态细胞是慢病毒载体系统推荐使用的菌株，具有较高的转化效率和稳定性。本文将详细介绍Stbl3感受态细胞的来源、特性及其具体的操作步骤，帮助实验人员更好地使用这种细胞进行相关实验。

Stbl3菌株来源于HB101 E.coli strain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。基因组含有重组酶recA13突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有LIAN霉素抗性，不存在lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。

High5TM系列Stbl3感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19检测转化效率>108cfu/μg DNA。

操作说明：

1. Stbl3感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入0.9mL室温S.O.C.培养基或LB培养基（推荐使用SOC培养基，可提高转化效率）。

4. 30℃，225rpm复苏90分钟。（当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control PUC19计算转化效率，则需37℃，225rpm复苏60分钟。）

5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C.培养基上。

6. 将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。（若转化controlPUC19计算转化效率，则需37℃培养过夜）