肿瘤细胞流式细胞分选详细操作步骤

肿瘤细胞流式细胞分选详细操作步骤

引用

丁香园

1.

https://3g.dxy.cn/bbs/topic/40279392

肿瘤细胞流式细胞分选是一种重要的实验技术，广泛应用于生物医学研究领域。本文详细介绍了流式分选Bxpc-3细胞的具体操作步骤，包括细胞消化、流式管准备、接收管准备、流式分选上机等环节，并提供了细胞细菌污染的挽救方法。

实验步骤

1. 细胞消化：培养于T75细胞培养瓶中处于对数生长期的Bxpc-3细胞加入PBS清洗2遍，加入4ml胰酶消化细胞，于细胞培养箱内静置3min，后在显微镜下观察细胞形态，是否皱缩变圆，直至细胞间连结消失，然后加入6ml完全培养液终止消化，用一次性吸管沿瓶壁吹打直至细胞脱落，将细胞悬液加入15ml离心管内离心，1000转／5min，弃上清，每个离心管内加入1ml双倍双抗PBS重悬。

2. 流式管准备：细胞计数后，流式分选细胞量按照每107／500ul重悬，70um细胞滤膜过滤细胞至流式管中，封口膜封口，放入冰盒内运输。

3. 接收管准备：15ml离心管内装入3ml双倍双抗培养液，封口膜封口，放入冰盒内运输。

4. 流式分选上机：严格遵循无菌原则，注意接收管容量，避免液体量过多溢出。分选结束后，尽快离心弃上清，用双倍双抗培养液培养细胞，由于细胞量较少，约5105个，将其置于6孔板内培养，每孔约2～3105个。

由于流式细胞分选术，及长时间运输对细胞活性有一定影响，且外部环境不易控制易导致细胞污染。

细胞细菌污染挽救步骤

1. 将污染的培养液倒掉，加入5-10mlPBS清洗细胞3-4次。

2. 加入3-5ml双抗，静置3-5min，然后吸出，再重复一次。

3. 加入5-10mlPBS清洗细胞2次。

4. 加入10ml完全培养液，加入2ml双抗，放置细胞培养箱内，5小时后弃培养液，加入PBS清洗2次，然后加入胰酶消化后，离心重悬，重新置于新的培养瓶内培养。

5. 24h后，视情况换液。

本文原文来自丁香园论坛