经典染料系列2——香豆素及其衍生物

经典染料系列2——香豆素及其衍生物

香豆素及其衍生物是一类重要的紫外线激发蓝色荧光染料，广泛应用于生物化学和分子生物学研究中。本文将详细介绍香豆素的光谱性质、相关产品及其应用，帮助科研人员更好地了解和使用这一类染料。

光谱性质

表1列出了7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AMCA）的光谱性质。

图1. AMCA（一种常用的香豆素衍生物）的激发和发射光谱。

iFluor™350 - AMCA和AlexaFluor®350的替代物

iFluor™350染料是一种与AMCA光谱相似的亮蓝色荧光染料，具有改善的水溶性、光稳定性和更高的荧光量子产率。iFluor™350偶联物非常适合于高丰度靶标的直接成像，在多色应用（例如流式细胞仪和超分辨率荧光显微镜）中特别有用，而不会影响绿色和红色荧光探针的性能。

图2.将HeLa细胞固定在4％甲醛中，然后用Phalloidin iFluor™350偶联物和Nuclear Orange™DCS1染色。

表2比较了iFluor™350、AMCA和AlexaFluor®350的性能参数。

香豆素相关产品

1. 参考标准

• 7-羟基-4-甲基香豆素（4-甲基伞形酮）（Cat# 41）
• 7-羟基-4-三氟甲基香豆素（Cat# 82）
• 3-氰基-7-羟基香豆素（Cat# 40）
• 6-氯-8-氟伞形酮（CF-MU）（Cat# 42）

2. 前体

• 7-氨基-4-三氟甲基香豆素（AFC）（Cat# 56）
• 7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）（Cat# 51）
• 2,4-二氟间苯二酚（Cat#4023）
• 4-氟间苯二酚（Cat#4022）

3. 反应性香豆素染料

反应性荧光香豆素和香豆素衍生物广泛用于共价标记生物分子，例如抗体、碳水化合物、核酸、蛋白质、肽和寡核苷酸。香豆素共轭物可产生适度明亮和光稳定的蓝色荧光，当与绿色、黄色或红色荧光探针结合使用时，通常用作检测酶活性或在彩色荧光研究中提供对比的底物。香豆素和香豆素衍生物很容易在各种染料标记化学中获得，包括：

• 琥珀酰亚胺酯/NHS酯 - 用于标记抗体、蛋白质、肽、胺修饰的寡核苷酸和其他生物分子上的游离胺（-NH？）
• 马来酰亚胺 - 用于标记抗体、蛋白质和肽上的巯基
• 叠氮化物 - 通过点击化学法标记亚乙基
• 炔烃 - 通过点击化学法标记叠氮化物
• 酰肼 - 用于标记醛基和酮基
• 羧酸 - 用碳二亚胺预活化后标记胺，或用于醇类的Steglich酯化
• 胺 - 用于标记各种亲电子化合物，例如活化的酯

表3列出了可用的反应性香豆素和香豆素衍生物。

Note：ε= 在其最大吸收波长处的摩尔消光系数（单位= cm^-1 M^-1）

4. 香豆素标记的酶底物

香豆素和香豆素衍生物经常用于制备荧光底物，以检测细胞和溶液中的酶活性。当被目的酶水解时，香豆素修饰的底物显示出与酶活性成线性比例的荧光强度增加。AAT Bioquest提供了多种香豆素修饰的底物，可用于检测Caspase、蛋白酶、肽酶、磷酸酶等的活性。

表4列出了可用的香豆素标记的荧光底物。

5. 香豆素标记的缀合物

香豆素标记的结合物因其亮蓝色荧光和出色的光稳定性而在生物成像和生物标记中具有广泛的应用。香豆素衍生物可以标记抗体、链霉亲和素、鬼笔环肽、膜联蛋白v和其他生物分子，以研究细胞凋亡、标记细胞器或通过放大微弱信号来提高测定灵敏度。

表5列出了可用的香豆素标记的缀合物。