动物行为实验指南：社交攻击-逃避测试方法详解

动物行为实验指南：社交攻击-逃避测试方法详解

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社交攻击-逃避测试（Social Attack-Escape Test）是一种用于评估小鼠在社交互动中逃避行为的实验方法。该测试通过观察小鼠在面对攻击性入侵者时的逃避速度、移动距离等指标，来研究动物的社交行为和应激反应。本文将详细介绍该测试的具体操作流程和行为量化方法。

实验范式

社交攻击逃避测试类似于居住者-入侵者测试，但更侧重于评估小鼠在社交互动中的逃避行为。实验通常使用不熟悉的攻击性雄性CD1小鼠作为入侵者。在实验开始前30分钟，将雄性小鼠放置在一个内衬干净玉米芯垫料的实验箱（40 × 30 × 20厘米）中。记录连续两个明暗周期（总计20分钟）内由社会攻击诱导的逃避速度和移动距离。每次小鼠测试后，需要更换垫料并用75%的酒精擦拭实验箱。

行为量化分析

使用视频记录和行为分析软件来量化攻击行为，分析包括第一次攻击的潜伏期、总攻击次数和每次攻击的持续时间。评分标准可能包括攻击行为的频率、强度、持续时间等。在一些研究中，可能会观察小鼠在较长时间内的攻击行为，以评估攻击行为的稳定性和持续性。

实验程序

社交挫败（Social Defeat, aSD）

第一天：

• 实验组：C57BL/6J小鼠被放入预先筛选过的CD1小鼠的笼子中，进行单一5分钟的社会挫败。
• 对照组：非挫败对照小鼠未接受任何社交挫败，留在Homecage。

24小时后：

• 实验组和对照组：所有小鼠被放入一个新的测试场地中，测试场地中有一个装在金属杯中的CD1小鼠（与之前的CD1小鼠为同窝）。小鼠在测试场地中探索5分钟，然后返回自己的笼子。

后续测试：

• 一周后、四周后、十二周后（部分小鼠）：小鼠再次被放入与第二天相同的测试场地中，测试场地中同样有一个装在金属杯中的CD1小鼠（与之前的CD1小鼠为同窝）。小鼠在测试场地中探索5分钟。

在24小时、一周和四周的时间点，CD1小鼠对实验小鼠来说是新奇的。在三个月的时间点，由于CD1小鼠的数量限制，实验小鼠被呈现一个早期时间点的CD1小鼠。

行为评分

• 直接攻击时间：实验小鼠受到的直接攻击时间（秒）。
• 被动顺从：在受到攻击时的冻结行为和逃离反应时间（秒）。
• 防御性顺从：实验小鼠采取防御姿势（通常是直立姿势）并坚守阵地的时间（秒）。
• 总顺从时间：将被动顺从和防御性顺从的时间相加，得到总的顺从时间。

视频分析

测试场地被分为两部分，距离装有CD1小鼠的金属杯最远的部分定义为“远区”，金属杯周围的16厘米直径区域定义为“交互区”。分析指标包括：

• 总移动距离（厘米）
• 在远区的时间（秒）
• 在交互区的时间（秒）
• 进入交互区的次数
• 回避小鼠定义：在300秒的测试时间内，在远区停留超过200秒的小鼠被定义为回避小鼠。

行为变化分析

1. 在“远区”的时间：
   在经历攻击性对抗（aSD，acute social defeat）24小时后，被击败的小鼠在场地的“远区”（远离对手的区域）花费的时间显著多于未被击败的小鼠。

2. 互动频率：
   未被击败的对照组小鼠与CD1小鼠的互动频率显著高于被击败的小鼠，这个频率是通过计算小鼠进入互动区的独立次数来衡量的。

3. 一个月后的回避行为：
   在一次攻击性对抗后的一个月，两组小鼠整体上不再表现出显著不同的回避行为。这可能意味着随着时间的推移，被击败小鼠的行为逐渐恢复正常，或者两组小鼠的行为差异随时间减弱。

攻击性对抗可以导致小鼠出现持续的行为变化，包括增加回避行为和减少社交互动。这些变化可能与小鼠的恐惧和焦虑水平有关，也可能反映了小鼠对攻击性经历的长期记忆和适应。