抗酸染色法实验操作指南

抗酸染色法实验操作指南

文档简介

抗酸染色法（ACID-FAST STAINING）是用于检测分枝杆菌（如结核杆菌）的一种实验室染色技术。该方法利用分枝杆菌细胞壁中大量脂质（主要是分枝菌酸）的特点，通过特殊染色和脱色步骤，使其在显微镜下呈现特定颜色，从而实现与其他细菌的区分。

实验原理

分枝杆菌的细胞壁内含大量脂质（主要是分枝菌酸）包围在肽聚糖的外面，一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。

染色操作

1. 初染：用木夹夹持玻片，滴加石炭酸复红，以盖满标本为度，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，如此反复数次，染3-5分钟，若染液蒸发减少，可再加染液。

2. 脱色：用3%盐酸酒精脱色至无红色染液流下为止。

3. 复染：用碱性美兰复染。

4. 镜检：吸水纸吸干后用油镜观察。

观察结果

• 抗酸菌：红色（+）
• 非抗酸菌和背景：蓝色（-）

结果报告

• “-”：仔细观察至少300个视野未发现抗酸菌；
• “±”：100一300个视野内发现1-2条抗酸菌（全部涂膜镜检3遍）；
• “+”：100个视野内发现3-9条抗酸菌（全部涂膜镜检1遍)；
• “2+”：10个视野内发现1-9条抗酸菌；
• “3+”：每个视野内发现1-9条抗酸菌；
• “4+”：每个视野内发现9条以上的抗酸菌。

注意事项

• 涂片时要充分研磨，固定温度要合适；
• 染色过程中染色时间要掌握好；
• 加热过程中不能让液体沸腾，冲洗时要等玻片冷却后冲洗，避免玻片炸裂；
• 掌握好脱色的时间和程度。