浅析四种叶绿素测定方法

浅析四种叶绿素测定方法

叶绿素含量是植物生长环节中一个重要的生理指标，由于其对周围环境很敏感，并与植物的光合作用、营养吸收等密切相关，被广泛作为植物生长的常规测定指标项目。叶绿素含量的测定方法有多种，在国际上以传统的Arnon法（也称研磨法）应用最为广泛。但该法需要把植物材料研磨并经转移、过滤或离心处理，不仅工作量大，而且不可避免地使试验人员较长时间与挥发于空气中的试剂相接触，对人体损害较大。近年来，直接浸取法受到重视，用不同配比的混合液对叶绿素进行提炼，证明了用混合液提炼的可行性，并对传统的Arnon法进行了改进，将样品冷冻处理后，用50℃丙酮静置提炼并进行测定，极大提高了工作效率。

研磨法

称取0.5g样品于研钵内，加入少量CaCO3和5mL80%的丙酮，将材料充分研磨细碎直至变白（约5min），转移至10mL具塞离心管中，定容至刻度，摇匀后置于4℃冰箱中静置12h,离心10min（2000r/min），取上清液测定。

直接浸取法

称取0.5g样品放入10mL具塞离心管中，用80%丙酮定容至刻度，于暗柜中静置72h浸取，取上清液测定。

样品冷冻后用50℃提取液提炼法

称取0.5g样品于10mL具塞离心管中，置冰箱中冷冻2h,取出后加入10mL在水浴锅中加热至50℃的80%丙酮，充分振摇后于暗柜中静置4h,取上清液测定。

叶绿素计法

叶绿素计是所有方法中最为快捷的，你只需手持叶绿素计，将叶片插入仪器的感应部位，然后合上测量探头即可。应用于这种测定的仪器又被叫做便携式叶绿素仪，因为该叶绿素计拥有小巧的机身，仅200g的重量，可以方便地装入口袋并带到现场进行测量。

在以上几种测定方法中，直接浸取法提炼效果最好，但耗时长，传统研磨法叶绿素的损失较大，冷冻后用50℃提取液提炼法操作简便且提炼速度较快，在提炼率和稳定性方面均显示良好的优越性。冷冻后用50℃提取液提炼法的最优试验条件为将试验材料冷冻1h后，静置提炼3h.而叶绿素仪法，则相较于其他三种化学方法，更加快速方便。而且用SPAD-502测定叶绿素含量时，不会对叶片造成损伤，这也是使用叶绿素计的另一大好处。因为你不需要摘下叶片，直接用仪器夹住叶片测定即可，这样就可以在作物的成长环节中全程对特定的叶片进行监测，进而获得更科学的分析结果