如何理解分析方法验证中的灵敏度

如何理解分析方法验证中的灵敏度

分析方法的灵敏度是评估方法检出能力的重要指标，根据不同的检测设备，具有不同的计算方式，但相关计算方式所得定量限，通常无法满足方法对精密度和准确度的要求，我们该如何应对。

名词解释

• 检测限：系指试样中被测物能被检测出的最低量。
• 定量限：系指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应符合准确度和精密度要求。对微量或痕量药物分析、定量测定药物杂质和降解产物时，应确定方法的定量限。

定量限、检测限的计算方式及解析

2.1、根据国内外相关期刊及指导原则，分析方法的检测限及定量限有四种统计方式

备注：上述计算方法获得的检测限数据须用含量相近的样品进行验证。应附测定图谱，说明试验过程和检测限结果。

2.2、解析

• 直观法：适用于显色反应等。
• 信噪比法：适用于能显示基线噪声的分析方法，在液相、气相等分析方法中使用较多，通常在目标峰前、目标峰后分别选择基线平稳、噪音小的时间段，信噪比通常是样品的峰高（Heitht）除以Noise(6*SD)[mAU]即得信噪比，示例如下：

该方法所得定量限需同时满足精密度和准确度的要求才能算作定量限，参照2020版《中国药典》9101项下精密度、准确度项下相关规定，通常信/噪比法确定的定量限受外界影响较大，无法满足相关要求。若想满足《中国药典》项下精确度的相关规定，就无法采用信/噪比约为10来界定方法的定量限，这是一对矛盾。

参照《中国药典》9101项下七、范围的相关规定，杂质的报告范围是从限度的-20%到限度的+20%；限度的-20%是否可以定义为定量下限，小于该限度即报告＜小于定量下限（注明相当于供试品浓度的%），范围内报告数据；参照ICHQ2(R1)的相关要求，若报告限为0.05%，采用紫外检测器，该浓度通常无法满足9101项下精密度、准确度的相关规定。

• 基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法：原子吸收、紫外检测等通常采用该方式，以紫外吸收为例：

Placebo 标准偏差(SD)的计算：SD=0.000075

回归曲线的斜率S为0.0631

LOD＝3.3SD／S=3.30.000075/0.0631=0.004ppm

LOQ＝10SD／S=100.000075/0.0631=0.012ppm

• USP<1200>可检测性

1. 配置一个在限度浓度的杂志标准品溶液
2. 配置一个添加了在限度浓度的杂质标准品的样品标准品溶液
3. 配置一个添加了（限度100%-%RSD*浓度）的杂质标准品的样品

如果1≤2且3＜2，则差异可被检测出。

灵敏度是分析方法的基本属性，标志着方法的检出能力，不同类型的检测器灵敏度不同，基于不同的检测设备，可采用不同的计算方式。但该浓度水平的精密度和准确度，应具体问题具体分析，不可生搬硬套指导原则，本人愚见，采用信/噪比等方式确定的定量限应定义为仪器设备的检测定量限，线性的最低点（即方法的定量下限）可高于该定量限，但需满足方法精密度、准确度及相关法规指南等对范围的要求。

参考文献

[1] 2014分析方法确认指引

[2] USP1200

[3] 2020版《中国药典》