利用PMA诱导THP-1分化为巨噬细胞的实用指南

利用PMA诱导THP-1分化为巨噬细胞的实用指南

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https://m.sohu.com/sa/830405617_121966560

THP-1细胞作为人单核细胞白血病细胞系，在科研领域常被用于诱导分化为巨噬细胞，以模拟体内巨噬细胞功能与特性，而佛波酯（PMA）是诱导这一过程的关键试剂。以下详述操作要点。

前期准备至关重要

先确保细胞培养环境稳定适宜，在含10%胎牛血清、1%青-链霉素的RPMI 1640培养基里，将THP-1细胞置于37°C、5% CO₂的细胞培养箱中常规培养，维持细胞处于对数生长期，此时细胞活性与增殖能力强，为后续诱导分化奠基。同时，准备高质量的PMA试剂，以DMSO溶解配制成储存液，-20°C避光保存，使用前依实验需求稀释到工作浓度。

诱导分化操作精细把控

取对数生长期THP-1细胞，计数后按1×10⁶个/mL密度接种至培养器皿，像6孔板、24孔板等依实验规模选定。加入PMA使其终浓度达20-100 ng/mL（常选50 ng/mL），轻柔摇匀确保均匀分布。随即放回培养箱，24-48小时是关键观察期。期间，细胞形态渐变，由悬浮的圆形单核细胞向贴壁伸展、胞体变大且有伪足伸出的巨噬细胞转化，显微镜下可清晰捕捉这一动态。

后续维护巩固分化成果

48小时后，移除含PMA培养液，用PBS轻洗2-3次，去除残留PMA，避免过度刺激细胞。更换为新鲜无PMA的完全培养基继续培养24小时以上，让细胞进一步成熟稳定。可借助免疫荧光检测巨噬细胞标志性蛋白CD14、CD68表达来验证分化成效，流式细胞术也能精准定量分析分化比例。

成功用PMA诱导THP-1分化巨噬细胞，需严格把控各环节。从前期细胞状态、试剂准备，到诱导中的浓度、时长，再到后续精心维护与鉴定，环环相扣，为科研获取高质量巨噬细胞模型，助力免疫学、炎症相关等多领域研究深入开展。