激光共聚焦显微镜线粒体荧光染料指南
激光共聚焦显微镜线粒体荧光染料指南
激光共聚焦显微镜是现代生物医学研究中不可或缺的工具，而线粒体荧光染料则是实现细胞亚结构可视化的重要手段。本文将为您介绍两种常用的线粒体荧光染料——JC-1和罗丹明123的工作原理及其在细胞凋亡研究中的应用，并简要介绍徕卡stellaris 5共聚焦显微镜的功能特点。
作为一种广泛应用的细胞染料，JC-1（亦被称为CBIC2(3)）在细胞亚结构可视化领域发挥着重要作用。其独特之处在于能够与线粒体膜电位结合，从而实现对线粒体状态的精确检测。通过与CellLight™荧光蛋白标记技术的结合，JC1为细胞生物学研究提供了更为全面的可视化解决方案。
JC-1是一种具备膜渗透性的阳离子染料。在细胞凋亡的背景下，它被广泛应用于线粒体完整性的研究。JC-1具有选择性，能够进入线粒体，并随着线粒体跨膜电位的变化而调整其荧光特性。当细胞健康且线粒体跨膜电位高时，JC-1会形成称为J-聚集体的复合物，发出红色/橙色荧光，激发波长介于485nm和585nm之间，最大发射波长为590nm。然而，在线粒体跨膜电位降低时，JC-1无法在线粒体基质中聚集，而转为单体状态，发出绿色荧光，激发波长范围为514/529nm。因此，JC-1成为了一种有效的工具，用于检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在流式细胞分析和荧光成像技术中，JC-1的荧光颜色转变可直接反映出线粒体膜电位的变化，进而作为细胞凋亡早期的重要检测指标。
罗丹明123，一种常用于细胞生物学研究的荧光染料，具有膜通透性。与JC-1相似，它也能选择性地进入线粒体，并随着线粒体跨膜电位的变化而改变其荧光特性。然而，与JC-1不同的是，罗丹明123在健康细胞中通常以单体形式存在，发出绿色荧光，激发波长为488nm，最大发射波长为530nm。当线粒体跨膜电位降低时，罗丹明123无法有效聚集，其荧光颜色保持不变。因此，在研究线粒体膜电位和细胞凋亡方面，罗丹明123虽然与JC-1有所差异，但同样发挥着重要作用。
罗丹明123（Rhodamine 123，简称Rh123）不仅是一种可透过细胞膜的阳离子，还是一种出色的线粒体膜电位指示剂。这种染料能够在几分钟内迅速在线粒体中积累，且对细胞无毒性影响。在正常细胞状态下，线粒体膜电位会引导罗丹明123进入线粒体基质，此时荧光强度相对较弱。然而，当细胞发生凋亡时，线粒体膜的完整性会遭到破坏，导致线粒体膜通透性转运孔的开放，进而引发线粒体膜电位的降低。这一过程中，罗丹明123会被重新释放出线粒体，从而发出强而明亮的黄绿色荧光。值得注意的是，罗丹明123的激发波长范围为507/529nm，这使得它在荧光染料中具有独特的光学特性。尽管如此，罗丹明也存在一些不足之处，如亲脂性较差、专一性有待提高以及发射波长相对较低等。但总体而言，罗丹明作为一种优秀的荧光染料，在细胞生物学研究领域仍然发挥着重要作用。
徕卡stellaris 5，是一款由SBC精心搭建的超高分辨率点扫描共聚焦显微镜，凭借其22mm的均匀大视场和8K的扫描最大分辨率，为科研人员提供了卓越的观测体验。此外，它还配备了高性能的Power HyD检测器系列，显著提升了光子检测效率。更为全面的功能模块，如拼图模块、Z轴序列拍摄模块、自动聚焦模块等，以及共定位分析和光谱拆分模块，为用户带来了极大的便利，能够轻松应对各种科研挑战。
徕卡stellaris 5，这款超高分辨率激光共聚焦显微镜平台，不仅代表着SBC在显微成像技术上的最新突破，更展现了其在生物医药研究领域的深厚实力。基于模块化设计，该平台集成了众多先进功能，能够提供精确的三维成像，为科研人员揭示细胞结构和动态过程提供了强有力的支持。无论是单细胞研究，还是空间多组学探索，它都能应对自如，成为尖端生物医药研究的得力助手。