碘化丙啶（PI）在细胞生物学研究中的应用

碘化丙啶（PI）在细胞生物学研究中的应用

碘化丙啶（Propidium Iodide，简称PI）是一种常用的荧光染料，在细胞生物学研究中发挥着重要作用。它不能透过完整的细胞膜，但在细胞凋亡晚期或细胞膜受损时，能够进入细胞并与核酸结合，发出红色荧光。PI常用于细胞活力检测、细胞周期分析以及细胞凋亡研究等领域。

图1 PI的化学结构式

技术原理

PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用这一特性，通常与Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mRNA原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。PI的单独染色也可以进行细胞周期的检测。

使用方法

1. 收集细胞，密度约 2×105~1×106。离心后吸除上清，轻弹管壁就剩下的液体重悬细胞。加入1 mL常温存放的PBS；
2. 将所有的重悬细胞转移到4 mL于-20ºC预冷的无水乙醇，在高速涡旋混匀的同时一边用枪缓慢的添加细胞悬液到乙醇内。于-20ºC乙醇中固定5 - 15 min。
3. 离心收集细胞，除去乙醇。轻弹管壁以弹松细胞后，加入5 mL室温的PBS。允许细胞水化15 min；
4. 用染色液（100 mM Tris, pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM CaCl2、0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet® P-40）稀释1 mg/mL（1.5 mM）PI储存液1:500，得到3 µM的PI工作液。1 mL 的PI染色液足够用于每个细胞样本的检测。
5. 样本制备步后离心收集细胞，去除上清，用手轻弹管壁以弹松细胞后，加入1 mL的PI染色工作液。室温孵育15 min后，流式细胞仪进行细胞分析。

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。4 ºC避光保存，至少一年稳定。

常见问题

1. 碘化丙啶（PI）是已知的诱变剂，因此PI溶液在丢弃之前需要先经过活性炭处理。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。