细胞培养前的无菌处理技术

细胞培养前的无菌处理技术

在细胞培养领域，无菌技术是确保实验成功的关键。本文将详细介绍细胞培养前的无菌处理技术，包括工作环境及表面处理、玻璃及塑料制品处理以及实验者操作技术三个方面，帮助科研人员掌握细胞培养的核心技术要点。

工作环境的无菌处理

在细胞培养早期，研究者主要依靠精湛的操作技术和靠近火焰来实现细胞的无菌化。随着技术的发展，层流超净台成为使工作台无菌化最经济有效的手段。这种设备可以在相对密闭的环境中进行组织培养，避免外界气流的干扰。

超净台通过HEPA过滤层循环空气，形成向下和向外的气流，有效阻挡外界空气污染物。使用时，研究者可以在超净台中安装空气喷射装置，并配备紫外灯。为了保持工作台的清洁，应定期使用70%乙醇或10%新洁尔灭进行擦洗，并使用连接到真空泵的密闭容器处理废弃液。

玻璃器具和塑料制品的无菌处理

一次性用品在细胞培养中广泛应用，塑料培养瓶因其表面处理更利于细胞附着而受到青睐。玻璃制品虽然可以耐受更低温度，但价格较高且需要反复处理。高压灭菌是常用的灭菌方法，玻璃器材应采用高压灭菌后快速风干法，瓶盖需松盖进行高压灭菌，玻璃吸管则需要塞上棉花后再进行灭菌。

无菌操作

无菌操作要求保证细胞培养皿、培养瓶内部以及吸管包裹层等内部的无菌状态。细胞培养应在超净工作台或有空气滤过装置的工作间里进行，所有操作均需在超净台中完成，包括瓶子的打开和吸管的使用。使用机械移液装置代替口吸，避免微生物污染。废弃的吸管和细胞培养瓶应放入可封装的容器中，并采用焚烧和/或高压灭菌法进行处理。

为了防止细胞系的交叉污染，超净台中应只进行一种细胞系的操作。培养箱中的细胞应经常置显微镜下观察，每周至少两次，以确定细胞的生长状态或有无明显的污染存在。不再需要的细胞应该立即丢弃，而不是继续留在CO2培养箱中。