细胞培养基配制与传代换液实验操作流程及注意事项

细胞培养基配制与传代换液实验操作流程及注意事项

细胞培养技术是生物医学研究的基础，广泛应用于肿瘤研究、药物筛选、基因功能研究等领域。本文将详细介绍口腔肿瘤细胞系的培养基配制与传代换液实验操作流程及注意事项，帮助研究人员掌握这一关键技术。

实验前准备

实验材料

• 细胞类型：口腔肿瘤细胞系
• 培养基：DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）
• 补充成分：10%胎牛血清（FBS），1%双抗PIS
• 细胞培养器具：六孔板、超净工作台、CO₂培养箱

准备基础培养基（50ml）

1. 取适量的DMEM（44.5ml）。
2. 根据需要，添加10%胎牛血清（5ml）和1%青霉素-链霉素（0.5ml）。

过滤灭菌

将培养基通过0.22 μm的过滤器过滤灭菌，避免细菌和真菌污染。

储存

将配制好的培养基分装到无菌的试管中，贴上标签并存放于4℃冷藏。

实验中步骤

实验材料准备

• 培养基：DMEM（添加10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素）。
• 试剂：0.15%胰蛋白酶（用于消化细胞），PBS（磷酸盐缓冲液）。
• 细胞培养器具：六孔板、超净工作台、CO₂培养箱。

细胞观察

使用JuLI系列成像仪观察细胞状态，确保达到80-90%融合度，且无明显污染。若融合度较低，进行细胞换液即可，让细胞再生长。

准备新培养基

预热新鲜培养基至37℃。

细胞清洗

1. 吸去旧培养基，加入适量PBS（约1 ml），轻轻摇晃以清洗细胞。

细胞消化

1. 加入适量的0.15%胰蛋白酶溶液（约0.5-1 ml），轻轻摇匀。
2. 将细胞放入37℃培养箱中消化1-2分钟，置于成像仪下观察细胞是否开始脱落。

停止消化，细胞收集

1. 当细胞开始脱落时，立即加入等体积的新鲜培养基（1ml）以停止消化。
2. 轻轻吹打皿底以确保细胞完全脱落。
3. 将细胞悬液转移至离心管中，离心1000 rpm，5分钟。

去除上清液，细胞重悬

1. 小心去除离心后的上清液，保留细胞沉淀。
2. 使用新鲜培养基重悬细胞，轻轻吹打均匀。

接种新培养瓶/皿并培养

1. 按照预定细胞密度（如1×10⁴至1×10⁵细胞/ml）接种至新的培养瓶/皿中。
2. 将接种好的细胞放入37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

实验注意事项

1. 传代频率：通常每3-5天进行一次传代，具体根据细胞生长情况调整。
2. 无菌操作：确保所有操作在无菌环境中进行，以减少污染风险。
3. 使用胰酶消化细胞要把握好时间，切勿消化过度。也可借助成像仪观察细胞形态以掌握消化程度。
4. 细胞状态监测：定期检查细胞生长和健康状况。