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浅谈体外基因修饰系统BLA上市申请的策略及流程

创作时间:

作者:

@小白创作中心

浅谈体外基因修饰系统BLA上市申请的策略及流程

引用

来源

https://bydrug.pharmcube.com/news/detail/b34aefbb255c641edf394c0b015f40bb

近年来，细胞治疗和基因编辑等技术手段蓬勃发展，相关临床医疗探索不断深入，为严重和难治性疾病提供了新的治疗理念和方法。

在人体外，采用基因工程技术构建的修饰系统，可有效地将遗传物质等转入特定目的细胞，用于修饰目的细胞的遗传物质、改变基因表达方式或调节细胞生物特性等。目前，慢病毒载体、γ-逆转录病毒载体等常见用于将嵌合抗原受体（Chimeric Antigen Receptor，CAR）基因导入T细胞，以实现CAR-T细胞对肿瘤的靶向杀伤；游离型载体（Episomal Vector）、仙台病毒载体等可用于将转录因子导入细胞，通过重编程获得诱导多能干细胞，为其衍生细胞产品的生产提供起始原材料。这些载体都被称为体外基因修饰系统。

体外基因修饰系统与最终细胞制剂的功能和活性紧密相关，因此在药物研发的各个阶段，体外基因修饰系统的研发、生产与质量控制亦是申请人和监管方关注的重点。从临床试验申请（IND）到上市申请（NDA或BLA），体外基因修饰系统的研究如何顺利对接上市申请和商业化的需求，是一个备受关注的话题。

本文将以CAR-T细胞治疗产品所用的慢病毒载体为例，对其上市申请的策略及流程进行探讨，供业内人士参考。

质粒和慢病毒载体的定位

图1：细胞治疗产品生产流程

慢病毒载体是典型的体外基因修饰系统。在CAR-T细胞治疗产品的制备过程中，慢病毒载体被用于在体外转导T细胞，以导入精心设计的CAR基因。它有别于常规生物制品的原液（Drug Substance, DS）和制剂（Drug Product, DP）概念，在很多已发表的文章中将其定义为关键生产原材料或中间体，但是其重要性不言而喻，如果没有慢病毒载体，最终细胞产品将不会具备任何CAR的功能。

关于“载体”的定义，在《细胞治疗产品生产质量管理指南（试行）》中有描述：指由生物材料组成或由生物材料衍生而成的可用于传递遗传物质的工具，如质粒、病毒或细菌等，它们被修饰以转移遗传物质。对于CAR-T细胞来说，载体是为疾病治疗提供药效活性的重要组成部分。根据中美欧等国家的指导原则和现已获批上市的几款CAR-T产品的审评实践，慢病毒载体在BLA上市申请时，需要按照对DS同样的要求递交完整的药学研究资料（CTD Module 3.2.S）。由此可见，从药学研究和审评这个角度，慢病毒载体的研究策略应视同DS。

经过多年的技术发展，慢病毒载体的生产已经有较为安全和成熟的工艺，应用最为广泛的是第三代4质粒瞬时包装系统。即1个穿梭质粒和3个辅助质粒，通过瞬时转染293T细胞，完成慢病毒的包装。其中，穿梭质粒携带目的基因，3个辅助质粒分别编码VSV-G、gag/pol和Rev，它们共同组成了慢病毒的完整结构。4个质粒在细胞治疗产品整体的生产工艺中处于上游，它们的定位是起始原材料或中间体。

质粒和慢病毒载体生产的GMP要求

明确了质粒和慢病毒载体的定位，接下来就是大家广泛讨论的GMP符合性问题。国内监管法规对于体外基因修饰载体的GMP要求较为明确，要求按照《药品生产质量管理规范》及其相关附录的要求执行，相关法规指南整理如下：

然而，对于质粒原材料是否需要严格执行GMP要求，目前没有明确的强制性条款。

由于基因治疗制品的复杂性和变异性，对生产用原材料来源和质量有较高的要求，质粒生产工艺和质量属性的稳定性影响最终制剂产品的稳定性，基于风险管理要求，建议对于拟上市CAR-T产品生产所用的质粒生产按照GMP要求执行。此外，根据《药品注册管理办法》，“必要时对药品注册申请所涉及的化学原料药、辅料及直接接触药品的包装材料和容器生产企业、供应商或者其他受托机构开展的延伸检查活动”。药品注册核查是基于风险的核查，在细胞治疗产品上市申请时，质粒原材料也有可能被延伸检查。因此，从合规性方面，我们也推荐质粒原材料的生产按照GMP要求执行。

以金斯瑞蓬勃生物为例，其开发出独特的生命周期各阶段合规（Phase-appropriate Compliance, PAC）质量体系，以符合全球严格的监管标准（包括美国FDA、欧洲药品管理局、中国国家药品监督管理局），同时，助力客户获得高质量、高成本效益、高效和可信赖的服务。

图2：质粒和慢病毒载体全生命周期质量合规策略

质粒和慢病毒载体在上市申请阶段的研究策略

临床试验期间生物制品药学研究具有渐进性、阶段性特征，遵循生物制品的研发规律，推进药学研究和变更，保证临床试验期间获得充分的药学研究数据支持，是生物制品完成临床试验和申报上市的基础。

变更策略

在产品开发早期（研发阶段和早期临床试验阶段），由于时间和资源的局限性，以及对产品知识和工艺经验积累的匮乏，需要在临床试验阶段持续的进行工艺优化、规模放大以及可能存在的生产场地转移（比如：中试车间转移至商业化车间），以匹配上市申请和商业化需求。因此，临床试验期间的变更是非常常见的，甚至是不可避免的。

同时，变更的计划和实施是至关重要的，这直接影响到产品开发和注册申报的策略。

CDE于2023年8月发布的《临床试验期间生物制品药学研究和变更技术指导原则（征求意见稿）》中，对于变更的一般原则提出了建议和指导。为保证生物制品研发有序开展，减少非预期变更造成的影响，应对临床试验期间药学研究和变更策略进行科学地规划和管理。不同于首次申请临床试验前研究，也不同于上市后变更研究，临床试验期间药学研究和变更是以不增加临床受试者安全性风险为前提，平衡风险与获益，使前期药学研发数据能够支持后期临床试验的开展，并为生物制品最终上市提供充分的支持。由于生物制品研发具有不确定性，完成确证性临床试验后的药学变更（如原材料短缺、临床试验期间对工艺认识更新等）难以避免。即便如此，对可能影响生物制品安全性和有效性的重大药学变更，一般不建议在该阶段实施，除非有充分的数据支持。

同年11月，CDE发布《自体CAR-T细胞治疗产品药学变更研究的问题与解答》，对于基因修饰系统的变更也给出了更为详细的指导意见。鼓励申请人/持有人通过工艺优化持续提高产品的质量和安全性，同时证明变更不对产品产生任何不良影响。研发期间，变更可比性研究的程度一般随着临床研究的推进而不断加强。确证性临床试验开展后，包括上市后阶段，建议谨慎考虑变更病毒载体工艺，如确需发生病毒载体工艺重大变更，经变更研究或评估认为风险较大时，需要开展体内桥接研究。对于慢病毒载体包装用质粒的变更，应结合具体变更事项开展风险评估，分析变更前后质粒质量的变化，采用“递进式”的策略开展可比性研究。

整体上，如果变更是不可避免的，应尽早完成变更，以降低变更对整体产品开发计划的影响。建议在确证性临床前完成所有重大变更，使确证性临床试验阶段的规模、工艺等方面与商业化生产的衔接更加密切。

工艺验证策略

质粒和慢病毒载体在上市申请前的研究策略，其核心就是完成相关重大变更和可比性研究，锁定生产工艺和生产规模，以及完成工艺验证和方法学验证的工作。对于慢病毒载体，上文中我们已经探讨了其视同DS的重要定位，因此，其上市申请阶段的研究策略应与DS相当，包括全面的工艺表征和工艺验证工作。慢病毒载体的工艺验证至少应包含三个连续的、完整生产工艺的批次。而对于质粒在上市申请阶段的研究策略，目前尚无明确的法规要求，可以参考上海医药行业协会于2023年5月发布的《免疫细胞治疗产品生产用质粒生产质量管理指南》（以下简称“指南”）开展相关研究工作，该指南代表了当前行业内的共识。

指南指出，穿梭质粒和通用型辅助质粒两类质粒的生产技术要求和质量控制原则应保持一致。工艺验证方面，应基于产品研发阶段、质粒特点、质粒工艺是否相同等因素结合质量风险管理原则进行风险评估，确定各质粒工艺确认或验证的批次和方案，如工艺过程控制确认、中间产物贮存稳定性研究、多批次质量分析以及杂质清除研究等。通常穿梭质粒（含有目的基因）工艺验证一般应包含三个连续成功的工艺生产批次，如需减少辅助质粒验证批次，首次验证应根据风险评估结果，选择其中一种有代表性的质粒进行三批次工艺验证，其他质粒工艺验证可根据风险评估结果制定验证方案。

基于此，金斯瑞蓬勃生物已经完成对三辅助质粒（LentiHelperTM Plasmid）的药学研究工作，并为上市申请准备了申报资料，这将极大地降低客户的成本、加速上市申请进程。

关于上市申请阶段药学研究策略的更多内容，请持续关注金斯瑞蓬勃生物微信公众号，后续将会分享更多内容。

上市申请流程

申请人在完成支持药品上市注册的药学、药理毒理学和药物临床试验等研究，确定质量标准，完成商业规模生产工艺验证，并做好接受药品注册核查检验的准备后，提出药品上市许可申请，按照申报资料要求向国家药品监督管理局药品审评中心（CDE）提交相关研究资料。上市申请的审评和批准流程如下：

图3：药品上市许可申请审评审批流程

备注：

注册检验除了上图中所述的一般流程外，申请人也可选择进行“前置注册检验”。
药品审评中心根据注册工作需要提出是否启动动态生产现场核查要求，由核查中心基于审评中心启动的核查任务开展动态核查。

更多关于中国上市申请、审评注册核查与注册检验的流程，请参阅金斯瑞蓬勃生物药政注册（RA）团队编写的《生物制品上市申请手册》。

总结

近年来，中国自体CAR-T细胞治疗产品的申报量增加，不同阶段的临床试验全面开展，多个产品不同适应症在中国批准上市。该领域技术发展迅速，法规指南日益健全，未来拥有广阔的发展前景。

CAR-T细胞治疗产品推进到上市申请阶段，需要完善药学研究，为药监机构审评提供夯实可靠的数据和材料，并在获批后确保持续提供安全、有效和质量可控的药品。本文对业界广泛关注的几个问题进行了探讨，以供从业者参考，也欢迎大家与我们交流意见。后续，我们将陆续推出针对慢病毒载体和质粒原材料的药学研究策略系列文章，进一步探讨上市申请前的药学研究工作（包括工艺验证、方法验证等），敬请期待。