实验指南 | 细菌的培养方法

实验指南 | 细菌的培养方法

细菌培养是微生物学研究中的基础实验技术，不同的细菌需要不同的生长环境。本文将详细介绍三种主要的细菌培养方法：一般培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法，帮助读者掌握细菌培养的基本技能。

一、一般培养法

一般培养法又称需氧培养法，将已接种好的平板、斜面、液体培养基，置于37℃培养箱内（图1）培养1824h，需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长。但菌量很少或生长缓慢细菌（如结核分枝杆菌），需培养37d直至1个月才能生长。

图1、电热恒温培养箱

为使培养箱内保持一定湿度，箱内可放置杯水；对培养时间较长的培养基，应将培养皿或试管口用石蜡或凡士林封固，以防培养基干裂。

二、二氧化碳培养法

某些细菌，如布氏杆菌、脑膜炎球菌等需要在含有5%~10%二氧化碳环境中才能生长，尤其是初代分离培养要求更严格。常用的二氧化碳培养方法有以下几种：

1.二氧化碳培养箱

已接种培养基直接放入二氧化碳培养箱（图2）内培养，即获得二氧化碳环境

图2、二氧化碳培养箱

2.烛缸法

将已接种细菌的培养基，置于容量 2000m,的口标本缸或干燥器内，缸盖或缸口处均需涂以凡士林，放入小段点燃蜡烛于缸内（蜡烛要直立，勿靠近缸壁），密封缸盖。待燃蜡自行熄灭时，容器内含5%~10%CO2，将容器置于37℃培养箱中培养

3.化学法(重碳酸钠-盐酸法)

按每升容积容器内加入重碳酸钠0.4g与浓盐酸3.5m比例，分别将两种药置于容器内（平皿内），连同容器置于标本缸或干燥器内，盖紧缸盖后使容器倾斜，使盐酸与重碳酸钠接触即产生二氧化碳。

三、厌氧培养法

厌氧细菌由于对氧敏感，在其分离鉴定过程中均需在无氧的环境培养，否则就不能生长甚至死亡。就此，人们创造了许多厌氧培养方法，目前常用的厌培养方法有厌氧罐法、气袋法及厌氧箱培养法三种。

1.厌氧罐法（适用于一般实验室，特点是较经济并迅速建立厌氧环境）

将接种好的平板放入厌氧罐（图3），拧紧盖子。用真空泵抽出罐内空气，使压力真空表至-79.98kPa停止抽气，充人高纯氮气使压力真空表指针回0位，连续反复3次。在罐内-79.98kPa情况下，充人70%N2、20%H2、10%CO2,。厌氧罐内需放入冷催化剂钯粒，催化罐中残余0,和H,化合成水。同时罐中应放有美蓝指示管。

图3、厌氧罐

注：美蓝有氧环境下呈蓝色，无氧时红色，临用前先将美蓝煮沸使其变成无色，放入罐内美蓝先呈浅蓝色，待罐内无氧环境形成时，美蓝即持续无色。

2.气袋法

此种方法需要特殊设备，操作简单，使用方便，不仅实验室采用，而且外出采样、现场接种也可采用。原理是采用塑料袋代替了厌氧罐，气袋透明而密闭。内装有气体发生安瓿，指示剂安瓿，含有催化剂带孔塑料管各1支。

操作方法：首先接种平板培养基放入袋中，用弹簧夹夹紧袋口，用手指压碎气体安瓿20min 再压碎指示剂安瓿，指示剂变蓝色，说明袋内达厌氧状态，即放人37℃培养箱中进行培养。

3.厌氧箱培养法

使用之前必须仔细检查厌氧装备有无漏气及催化剂、指示剂质量等问题。使用时严格遵守操作规程，保证箱内气体比例合理。