PCR,RT-PCR,实时荧光定量PCR的区别与联系

PCR,RT-PCR,实时荧光定量PCR的区别与联系

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PCR（聚合酶链式反应）、RT-PCR（反转录PCR）和实时荧光定量PCR是分子生物学中常用的核酸扩增技术，它们在基因检测、疾病诊断等领域有着广泛的应用。本文将介绍这三种技术的区别与联系。

PCR（聚合酶链式反应）

PCR是最基础的核酸扩增技术，其原理是以DNA为模板，通过上下游引物，在DNA聚合酶的作用下，实现DNA的指数级扩增。PCR技术的基本步骤包括：模板DNA的变性、引物与模板的退火、DNA的延伸。通过循环这些步骤，可以将特定的DNA片段扩增数百万倍。

RT-PCR（反转录PCR）

RT-PCR全称为反转录PCR（reverse transcription PCR），主要用于RNA的检测。其基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录，生成cDNA（互补DNA），然后将cDNA作为模板，设计引物进行扩增。RT-PCR是一种检测基因表达的常用方法，广泛应用于基因表达分析、病毒检测等领域。

实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）是在PCR的基础上发展起来的一种技术，其最大的特点是能够在PCR反应过程中实时监测产物的生成情况。通过在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针，可以实时监测荧光信号的变化，从而实现对初始DNA浓度的定量检测。实时荧光定量PCR具有高灵敏度、高特异性和高通量的特点，广泛应用于基因表达定量、病原体检测等领域。

三者的关系

RT-PCR和实时荧光定量PCR都属于PCR技术的衍生技术。在RNA实验中，这两者常常会联合使用。例如，要比较两个组织中某个基因的表达差异，首先需要提取这两个组织的总RNA，然后通过RT-PCR检测该基因是否在两个组织中有表达，最后通过实时定量PCR测定该基因在两个组织中的表达量是否具有显著性差异。