掌握配制培养基制备、灭菌与消毒的一般方法和步骤

掌握配制培养基制备、灭菌与消毒的一般方法和步骤

培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。掌握培养基的配制、灭菌与消毒的一般方法和步骤是进行微生物学实验的基础。本文将详细介绍培养基的配制原理、方法和步骤，以及各种灭菌方法的原理和应用。

培养基的配制

原则

1. 目的确立：根据实验目的选择合适的培养基类型。
2. 营养协调：确保各种营养物质的比例适宜。
3. 控制条件：调节pH值、渗透压等环境因素。
4. 经济节约：在保证效果的前提下降低成本。

方法

1. 查阅文献：了解现有培养基的配方和使用情况。
2. 精心设计：根据实验需求调整配方。
3. 试验比较：通过实验验证培养基的效果。

步骤

1. 称量：准确称取各种原料。
2. 熔化：将固体原料溶解于水中。
3. 调pH：调节溶液的酸碱度。
4. 过滤：去除杂质，确保培养基的纯净。
5. 分装：将培养基分装到适当的容器中。
6. 加塞：密封容器，防止污染。
7. 包扎：用牛皮纸等材料包扎容器口。
8. 灭菌：通过高压蒸汽等方法灭菌。
9. 冷却：让培养基自然冷却至适宜温度。
10. 无菌检查：确认培养基无菌。

培养基种类

1. 按成分划分：

• 天然培养基：主要成分为天然物质。
• 合成培养基：所有成分均明确且可定量。
• 半合成培养基：部分成分天然，部分成分合成。

2. 按物理状态划分：

• 固体培养基：加入凝固剂（如琼脂）的培养基。
• 液体培养基：无凝固剂的液态培养基。
• 半固体培养基：琼脂含量较低，呈半固体状态。

3. 按用途划分：

• 基础培养基：提供微生物生长的基本营养。
• 加富培养基：添加特殊营养物质以促进特定微生物生长。
• 鉴别培养基：通过颜色变化等特征鉴别不同微生物。
• 选择培养基：抑制不需要的微生物，促进特定微生物生长。

常见培养基配方

1. 牛肉膏蛋白胨培养基

• 牛肉膏：3g
• 蛋白胨：10g
• NaCl：5g
• 琼脂：15～20g
• 水：1000mL
• pH：7.0～7.2

2. 高氏1号培养基

• 可溶性淀粉：20g
• KNO3：1g
• NaCl：0.5g
• K2HPO4·3H2O：0.5g
• MgSO4·7H2O：0.5g
• FeSO4·7H2O：0.01g
• 琼脂：15～20g
• 水：1000mL
• pH：7.4～7.6

3. 查氏合成培养基

• NaNO3：3g
• K2HPO4：1g
• KCl：0.5g
• MgSO4·7H2O：0.5g
• FeSO4：0.01g
• 蔗糖：30g
• H2O：1000mL
• pH：自然

4. 麦芽汁培养基

• 干麦芽粉加4倍水，在50-60℃保温糖化3-4小时
• 用碘液试验检查糖化程度
• 调整糖液浓度，煮沸后过滤
• 调pH为6.0

消毒与灭菌

概念区分

• 消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体。
• 灭菌：杀灭一切微生物的营养体、芽胞和孢子。

方法

1. 物理方法

• 加热：火焰灼烧、热空气灭菌、高压蒸汽灭菌等。
• 过滤：通过过滤器去除微生物。
• 辐射：紫外线、X射线等。

2. 化学方法

• 使用化学试剂抑制或杀灭微生物，如重金属离子、磺胺类药物及抗生素等。

加热法

1. 干热法

• 火焰灼烧：适用于金属用具的快速灭菌。
• 热空气灭菌：利用高温干燥空气（160-170℃）加热灭菌1-2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。

2. 湿热法

• 高压蒸汽灭菌：使用高压灭菌锅，时间根据物品种类和数量不同而变化。
• 常压蒸汽灭菌：适用于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基。
• 煮沸灭菌：适用于注射器和解剖器皿，时间10-15min。
• 超高温杀菌：135-150℃和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。

辐射灭菌

• 紫外线：波长在200-300nm，以265-266nm杀菌力强。适用于无菌室和医院等场所。

化学药品灭菌

• 常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸、福尔马林、高锰酸钾、新洁尔灭等。

微生物的分离、纯化及培养技术

分离与纯化

• 从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。

常用方法

1. 单细胞挑取法
2. 稀释涂布平板法
3. 稀释混合平板法
4. 平板划线法

稀释涂布平板法

1. 倒平板：将培养基冷却至55-60℃时倒平板。
2. 制备污水稀释液：将土样加入无菌水中振摇制备。
3. 涂布：将稀释液涂布于平板上。
4. 培养：根据不同培养基在适宜温度下培养。
5. 挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。

平板划线法

1. 倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。
2. 划线方法：使用接种环在平板表面划线。

稀释混合平板法

1. 先加菌液
2. 倒平板时注意培养基温度
3. 混合均匀。

微生物培养技术

1. 斜面接种
2. 液体培养基接种
3. 穿刺接种

将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培养箱中培养，将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保存。