数字化Western Blot蛋白质印迹定量分析技术
数字化Western Blot蛋白质印迹定量分析技术
数字化Western Blot（Digital WB）蛋白质印迹定量分析技术是传统WB实验技术的高效替代方案。该技术可在同一根毛细管中完成样品分离、捕获、固定、免疫检测和定量分析，实现传统WB的所有实验步骤自动化，有效提高蛋白质表达定量结果的精确性和重复性。
Digital WB(也称Simple Western)技术是传统WB实验技术的高效替代方案。使用该技术，可在同一根毛细管中完成样品分离、捕获、固定、免疫检测和定量分析，从而实现传统WB的所有实验步骤（包括蛋白质上样、分离、免疫印迹、洗涤、检测以及数据分析）自动化，有效提高蛋白质表达定量结果的精确性和重复性。全自动Digital WB技术显著地缩短了样本检测时间到3小时，直接采集化学发光或荧光信号值，利用数字化信号峰面积来表征蛋白含量，短时间内实现了目的蛋白的可视化精准定量分析。
技术特点
Wes全自动蛋白质免疫印迹系统采用革新的Simple Western技术，颠覆30多年传统的Western Blot方法，实现在同一根样品管中完成样品分离、捕获、固定，免疫检测和定量分析。
1、不用制胶和跑胶，不用转膜，减少实验步骤，避免样品损失，避免人工误差的引入，提高结果稳定性。
2、自动进行一抗二抗孵育和化学发光检测，自动进行结果分析，有效提高检测结果的精确性和重复性。
3、单个样品上样体积3-5ul，节约珍贵样品和抗体。
4、检测灵敏度高，低至pg级。
5、实验完成后自动给出详尽的分析数据，包括目的蛋白大小、信噪比、峰面积和含量。
6、可对结果自动进行精确的定量分析。
7、标准实验流程：全程质控数据可溯源，规避孔间/批间操作差异。
实验流程
结果展现
成像图（毛细管实际曝光图）
峰形图（峰面积为化学发光信号值）
泳道图（分子量上大下小）
应用范围
可自动进行各种蛋白质样品分离、免疫检测、定性和定量分析，广泛应用于蛋白质性质鉴定、蛋白质定量分析、蛋白质功能研究、蛋白质修饰和表达差异研究、抗体研究等多个领域。
优势应用领域：
- 低丰度样本：如外泌体、膜蛋白等
- 珍贵实验材料：如干细胞，流式分选细胞等
- 来源受限样本：临床组织切片等
样品要求
1、样品的制备方法与传统Western相同：样品保存在裂解液(Lysis Buffer)中, 某些裂解液成分可能会对实验结果有影响。不要加入Western上样缓冲液(Loading buffer)。
2、通过BCA试剂盒测定蛋白质浓度。
3、送样浓度建议在3 μg/μL或以上，如果靶蛋白丰度低(如磷酸化蛋白)，推荐上样终浓度2 μg/μL，其他靶蛋白可选择 0.5 μg/μL。
4、测定浓度后，样品可分装冻存在-80 ℃冰箱，干冰邮寄。
应用案例
珍贵实验材料
干细胞、流式分选少量细胞等
样本来源：临床分选得到的骨髓干细胞
检测用量：2500个骨髓干细胞
文献来源：The impact of integrin β2 on granulocyte/macrophage progenitor proliferation. STEM CELLS. 2018
低丰度蛋白
外泌体、膜蛋白等
样本来源：M1 样巨噬细胞衍生的细胞外囊泡 (M1EVs)
检测用量：~0.5ug总蛋白（上样浓度约0.1ug/ul）
文献来源：Exploration and functionalization of M1-macrophage extracellular vesicles for effective accumulation in glioblastoma and strong synergistic therapeutic effects. Signal Transduction and Targeted Therapy 2022
样本来源：细胞膜紧密连接蛋白claudin-5（干燥症）
检测用量：~0.1ug总蛋白（上样浓度约0.02ug/ul）
文献来源：Disruption of endothelial barrier function is linked with hyposecretion and lymphocytic infiltration in salivary glands of Sjögren‘s syndrome. Molecular Basis of Disease. 2018
来源受限样本
临床样本、生殖细胞等
样本来源：临床心衰病人心肌内膜活检样本
HFrEF样本取自原位心脏移植前扩张性衰竭心脏的右室间隔；
对照样本取自未衰竭、移植的、未使用的供体心脏的右室间隔。
文献来源：Nitrosative stress drives heart failure with preserved ejection fraction. Nature, 2019
样本来源：小鼠2-cell胚胎
检测用量：132个2-cell胚胎用于检测3个靶蛋白（7ul 裂解物）
文献来源：Broad histone H3K4me3 domains in mouse oocytes modulate maternal-to-zygotic-transition. Nature
本文原文来自搜狐