【干货】方法验证和方法确认

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@小白创作中心

【干货】方法验证和方法确认

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http://www.360doc.com/content/25/0203/23/55195405_1145861832.shtml

方法验证和方法确认是实验室分析工作中非常重要的环节，它们确保了检测结果的准确性和可靠性。本文详细介绍了方法验证和方法确认的相关内容，包括定义、适用范围、报告要求、测试能力可持续性、更新、选择性、线性范围、检出限、定量检出限、准确度、精密度、不确定度评估、稳健度、灵敏度与测量范围以及基质效应等方面的内容。

定义及要求

方法验证（Method Verification）
提供客观证据，证明给定项目满足规定要求。
方法确认（Method Validation）
未在本资料中给出具体定义，但通常指通过全面评估方法的适用性、准确性、可靠性等，确认其是否适合用于特定分析目的。

方法验证适用范围

方法验证适用于以下情况：

完全按照国际、区域或国家标准执行的分析方法。
使用供应商已验证过的方法、试剂和设备，且未进行任何偏离。

方法确认适用范围

方法确认适用于以下情况：

使用非标准方法。
实验室自行设计和研发的方法。
对标准方法进行了重大修改。
超出标准方法的预期用途，如样品类型不同。
使用新的检测技术。
关键参数（如试剂、设备、时间、温度等）的修改。

方法验证/确认报告

方法验证/确认报告应包括以下内容：

引用的标准/参考文件。
设备、环境、设施、标准物质和关键耗材等技术参数的符合性说明。
方法验证/确认参数的确认记录及汇总。
方法不确定度的评估。
作业指导书（SOP）。
人员能力评估（培训、评估、授权）。
实际的测试报告（含原始记录）。
必要时，参加实验室间比对或外部比对的结果。

方法测试能力可持续性

实验室所有的测试方法需每年进行评审。当检测过程未涉及实质性技术变更，且日常测试的质控项目包括检出限监控时，可不再进行方法再验证。否则，需根据需要进行再验证评估。

方法更新

对于标准方法，需进行查新以确保采用最新版本。当检测标准发生实质性技术变更时，需进行再验证评估。定量方法的更新可能包括外标法改为内标法、定量曲线范围调整、测试仪器变化（如GC调整为LC）、前处理溶剂、温度、提取方式（超声、索式）等变化，以及基质扩展或变更。

选择性

选择性指方法区分待测分析物和其他物质的能力。验证时应检查以下方面：

已知空白或最低浓度基体的检出及干扰。
过程空白溶液加标的检出及干扰。
样品基体溶液加标的检出及干扰。
实验室自制方法应说明可能存在的干扰。

线性范围

应使用至少5个标样（除空白外）建立校准曲线，曲线点应均匀分布。同时，需考虑LOQ、限值和大多数样品的含量范围，并至少进行随机顺序的重复测试3次以证明其重复性。
线性相关性评估：对于筛选方法，线性相关性系数r应大于0.98；对于常规定量方法，r应至少大于0.995。

方法检出限（MDL）

方法检出限可通过以下两种方式评估：

目视评价法：在样品空白中加入10次理论检出限浓度的分析物，若阳性检出/阴性检出为10/0，则此浓度为MDL；否则需调整检出浓度进行尝试。
空白标准偏差法：根据空白样品的标准偏差计算MDL。对于分光光度法，在没有前处理的情况下，可采用扣除空白值后与0.01吸光度相对应的浓度值作为MDL，计算公式为：MDL=0.01/b（b为回归直线斜率）。