转移瘤模型实验方法详解

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@小白创作中心

转移瘤模型实验方法详解

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来源

http://www.justscience.cn/wdoc_24185404.html

转移瘤模型是研究肿瘤转移过程的重要实验方法。通过构建动物模型，研究人员可以观察肿瘤细胞在体内的转移情况，揭示肿瘤转移的机制。本文将详细介绍转移瘤模型的实验原理、步骤和结果分析。

肿瘤转移是指癌细胞从原发灶脱落侵入周围组织，最终克服远隔组织微环境，实现转移的现象。转移瘤（metastatic tumor）实验是利用肿瘤转移动物模型对体内肿瘤转移过程进行研究的方法，其可以更好地揭示肿瘤转移的过程、基因的生物学功能及信号通路的作用。

实验原理

肿瘤细胞具备一定的侵袭转移的能力，把肿瘤细胞注射入动物的血液系统内，能够较好地模拟肿瘤细胞脱离原发灶进入到血液循环中的情况，通过观察远处器官（肺、肝等）内转移灶的形成情况，能够判断肿瘤细胞的转移能力。常用的接种方法是尾静脉注射和左心室注射法。

实验步骤

1. 制备细胞悬液

预先将细胞接种到培养皿并于37 ℃、5% CO2的培养箱中培养，待对数生长期的细胞生长达到80 %-90 %，经胰酶消化制备细胞悬液。对细胞悬液进行细胞计数，并调整细胞密度。

2. 小鼠的选择和分组

一般选择4-6W同一性别健康小鼠，大多选择免疫缺陷型小鼠。根据实验目的进行实验分组。

3. 肿瘤转移模型的构建

3.1 尾静脉注射法

在超净台上，将小鼠固定在固鼠器内，压住鼠尾巴根部，用酒精棉球擦拭尾巴消毒并扩展血管，用1 mL注射器吸取细胞悬液，于尾部中处三分之一处进针，注意控制速度防止小鼠发生栓塞。每只0.1 mL，即1×106个。不同细胞接种量可能不同，需要预实验进行摸索。

3.2 左心室注射法

小鼠经麻醉、仰卧式固定、酒精棉球消毒后，轻按胸部，在胸骨左侧第二，三肋间进针（靠近胸骨），注射器内留有气泡时，针头进入左心室；进针3-5 mm，以观察到鲜红血液喷射涌出进入针管，回血液面随着裸鼠心率搏动上下起伏，作为进入左心室的标准；注射，在10 s 内完成；注射完毕后缓慢拔针，棉签按压进针点；裸鼠放置保温台待苏醒；接种后的裸鼠置于SPF环境内饲养，并密切观察。