TSA技术在病理学中的应用：原理、优势及应用场景

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@小白创作中心

TSA技术在病理学中的应用：原理、优势及应用场景

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来源

https://biomice.com.cn/news/zhishi/5304.html

酪氨酸信号放大（TSA）技术是多重免疫组化（mIHC）的代表性技术，通过酶学检测方法实现单个组织切片上多个靶标的标记。该技术在肿瘤免疫微环境分析、细胞间相互作用研究等领域具有重要应用价值。

常规免疫组化（IHC）是组织病理学中广泛使用的诊断技术。然而，这种技术存在许多局限性，包括观察者之间的高变异性和每个组织切片仅能标记一个标记物的能力。为规避这些限制而出现了各种高度多重染色技术，允许在单个组织切片上同时检测多个标记物，并全面研究细胞组成、细胞功能和细胞间相互作用。在这些技术中，多重免疫组化技术（mIHC）尤其有代表性。mIHC 提供高通量多重染色和标准化定量分析，不仅可以对组织细胞原位靶标类别、组分、表达量等信息进行分析，还可以研究各靶标相互作用的空间位置信息，可实现高度可重复、高效且具有成本效益的组织研究。该技术在转化研究和临床实践方面具有直接的潜力，特别是在癌症免疫治疗时代。

TSA技术原理

TSA即酪氨酸信号放大 (Tyramide dignal amplification) 技术，是mIHC的代表性技术，是一类利用辣根过氧化酶(Horseradish Peroxidase, HRP) 对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。该方法主要原理是酪胺(Tyramide)的过氧化物酶反应(酪胺盐在 HRP 催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)共价结合，该方法可在一张组织切片上实现6-8种靶标的标记，通过荧光图像分析挖掘组织微环境中的复杂信息，如定量分析、共表达确定细胞分型、空间关系分析等等。

TSA技术优势

与传统免疫荧光相比，TSA多重染色技术在能够完整显现组织原位形态信息的同时，还具有如下的特点和优势：

首先是信号放大，TSA技术可以用于检测传统免疫荧光无法检出的低丰度靶标。基于酪酰胺的信号放大技术能够提供极强的灵敏度、检测极微量的目的抗原。
传统免疫荧光受传统染色成像的限制，靶标一般少于 3 个，无法完整分析组分信息。而多重荧光免疫组化可实现6-8多因子共定位，可以获取更多的生物信息，且样本需求量较少。
不受一抗种属的限制由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，同源异源都一个步骤，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。
再次是能大大节约一抗，因为是信号放大技术，为避免背景荧光过强，所以一抗稀释比是常规建议稀释浓度的5-10倍。

TSA操作步骤

TSA技术的染色流程与经典免疫组织化学染色步骤相近，值得注意的是，依次加入一抗的过程中，额外增加了修复热处理洗脱步骤，该步骤可以将以非共价键结合在抗原上的抗体去除，但是仍然保留以共价键结合在抗原表面的TSA荧光信号，从而实现无抗体干扰的抗原直接标记，再经过多轮染色循环实现多色标记，无需考虑多种抗体之间的非特异反应。直至全部标记完成，复染DAPI后封片观察即可