革兰氏染色实验原理及影响结果准确性的关键因素

革兰氏染色实验原理及影响结果准确性的关键因素

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革兰氏染色是一种常用的细菌鉴别方法，自19世纪80年代由丹麦医生GRAM创立以来，一直广泛应用于细菌的检测和分类。在中国，GB 4789系列的国家标准中，许多致病菌的检测均需要采用革兰氏染色法。因此，熟练掌握革兰氏染色的微生物检验员才能称得上是一名合格的检验员。

革兰氏染色原理

细菌细胞经过结晶紫初染和碘液媒染后，会在细胞壁内形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物。然而，革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖网层次较多且交联致密，因此在遇到乙醇或丙酮脱色处理后，因失水导致网孔缩小，同时不含类脂的革兰氏阳性菌在乙醇处理过程中不会出现缝隙。这使得结晶紫与碘复合物能够牢固地留在细胞壁内，从而使细菌呈现紫色。相反，革兰氏阴性菌的细胞壁薄，外膜层类脂含量高，肽聚糖层薄且交联度差，在脱色处理后，以类脂为主的外膜会迅速溶解，导致结晶紫与碘复合物的溶出，使得细菌呈现无色状态。随后，通过沙黄等红色染料复染，革兰氏阴性菌会呈现红色。

革兰氏染色步骤

革兰氏染色的步骤包括涂片、晾干、固定、染色、水洗、媒染、脱色和复染。

影响革兰氏染色结果准确性的关键因素

影响革兰氏染色结果准确性的关键因素主要包括试剂质量和染色菌的选择。首先，我们需要确保所使用的试剂是有效的。实验室应建立严格的试剂管理制度，从试剂的采购到储存、使用以及过期废弃都有明确规定，以确保试剂的有效性。其次，染色菌的选择也非常重要。菌龄对革兰氏染色结果的影响很大，因此我们应该选择处于活跃生长期的细菌进行染色，这样可以获得较高的准确率