手把手教学｜细胞复苏
手把手教学｜细胞复苏
细胞复苏是从冷冻保存状态中将细胞重新激活到生长状态的过程。细胞复苏是生物医学研究中常见的实验操作之一，正确的复苏步骤和注意事项对于保证细胞的存活率和后续实验的成功至关重要。本文将详细介绍一般贴壁细胞系的复苏步骤。
细胞复苏前准备：提前开水浴锅并预热至37-40℃，取3ml预热好的完全培养基于15ml离心管中准备。
细胞融化：从液氮罐或负八十冰箱中取出冻存管（注意做好防护），将其装入透明密封袋或一次性PE手套后迅速没入37-40℃的水浴锅中，并不断摇动，尽可能使冻存液在一分钟以内融化80%，最多不超过两分钟。
细胞转移：将冻存管喷洒酒精后转移至生物安全柜，用预热过的完全培养基慢慢稀释解冻的细胞，将细胞转移到离心管中。
细胞离心、培养：离心机800—1000 rpm，低速室温离心5分钟（去除死细胞和大部分冻存液），去除上清液，用新的完全培养基充分重悬细胞为单个细胞状态，加入培养皿或培养瓶中，摇晃混匀后静置数分钟后放入37°C、5% CO2的培养箱中过夜培养。
观察细胞状态：定期观察细胞培养基的颜色变化以及细胞形态变化，检查其有无污染等异常现象。
更换培养基：若贴壁细胞在过夜后几乎所有活细胞已经贴壁，应更换完全培养基，去除可能存在的残留的DMSO或其他冷冻保护剂对细胞产生的伤害，并提供新鲜的培养基以支持细胞的正常生长。
细胞传代：一旦细胞正常生长并达到足够的密度，可以进行细胞的传代，具体消化传代时间取决于细胞类型与细胞密度。如果复苏后的细胞过少或状态不够稳定可以原瓶传代培养，待细胞状态稳定后再进行实验。
注意事项
每种类型的细胞都可能有特定的复苏步骤，因此最好根据特定的细胞系和实验要求来调整和优化复苏过程。
细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融。快融一是防止长时间室温下DMSO对细胞产生毒性，二是在恢复室温的过程中，水分会重新进入细胞并形成冰晶，快速升温可以使冰晶迅速融化，从而保护细胞。
复苏后一般根据冻存时不同细胞量、冻存时细胞状态或生长速率、冻存时间的长短来决定于10cm大皿还是6cm中皿中培养，或在离心后用培养基重悬细胞计数决定，因为有些细胞系在种板后成活细胞密度较低的情况下不利于增殖。
本文原文来自哔哩哔哩，作者胡图图。