96孔板接种细胞铺匀详细步骤

96孔板接种细胞铺匀详细步骤

在生物医学研究中，细胞培养是一项基础且重要的实验技术。而细胞的均匀接种是确保实验结果准确性和可重复性的关键步骤之一。本文将详细介绍如何使用96孔板实现细胞的均匀接种，同时也会介绍其他孔板的接种方法。

96孔板细胞接种详细步骤

1. 细胞悬浮液添加与敲击法

• 在96孔板的每个孔中加入100微升细胞悬浮液。从底部附近的井的左侧开始添加。
• 加入一半平板后，混合细胞悬液，不要再加入，继续加入剩余的一半平板。
• 添加完所有板后，盖上板，用左手轻轻握住板的左侧，用右手轻轻轻敲板的右边缘，注意抓力（通常轻敲三次）。
• 顺时针旋转盘子（逆时针效果不好），依次敲击剩余的三面，静置约5分钟，放入37度培养箱中。

2. 观察与分散

• 加入细胞悬液后，抬起细胞培养板，从底部向上观察光线，看细胞是否聚集。
• 如有聚集，从底部敲击以分散。

3. 使用平板振荡器

• 如果实验室有平板振荡器，建议用这个仪器轻微振荡。效果好，即振幅小、频率高。

4. 细胞离心后处理

• 细胞应该尽可能分散，大多数细胞处于单一状态。离心后，完全悬浮！
• 有转移到六孔板上的，就是震动！摇晃时，不要让细胞液转向，否则细胞会全部被带到中间而不均匀！

5. 六孔板接种方法

• 当一瓶细胞装满后，进行正常处理。将它均匀地吹进培养瓶中，然后铺上6孔板，每孔2ml。
• 涂抹后，不用观察直接用酒精棉擦拭，然后放入培养箱中。
• 稍微向左三圈，向右三圈，先三圈，然后三圈。基本上，24小时后，每个孔中的细胞将非常均匀。

6. 液体和细胞数量计算

• 计算所有所需的液体和细胞数量，混合均匀，并将其添加到六孔板中。
• 六孔板呈水平8字形波动。在显微镜下观察。如果不均匀，按照上述方法再次摇动。
• 如果细胞没有计数并直接种植，在种植六孔板的过程中随时摇动混合瓶。通常顺时针或逆时针转动瓶子。

7. 摇动与静置

• 先上下移动，然后在水平板上左右移动，每个方向移动5-6次。
• 但关键是摇动后直接放入培养箱，不要做太多的运动，如照镜子，否则很容易在中间再次聚在一起。

本文原文来自生物谷